SM-164聯(lián)合多柔比星促進人骨肉瘤HOS細(xì)胞凋亡機制的研究.pdf

1、I分類號：密級：UDC：學(xué)號：406521211185南昌大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文SM164聯(lián)合多柔比星促進人骨肉瘤聯(lián)合多柔比星促進人骨肉瘤HOS細(xì)胞凋亡細(xì)胞凋亡機制的研究機制的研究SM164combinedwithDoxubicinonmechanismofapoptosisinHumanosteosarcomaHOScellline江建江建培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院指導(dǎo)教師姓名、職稱：舒勇教授主任醫(yī)師申請學(xué)位的學(xué)科門類：

2、醫(yī)學(xué)學(xué)科專業(yè)名稱：外科學(xué)（骨科）論文答辯日期：2014年6月7日答辯委員會主席：殷明評閱人：陳鋼徐永武2014年6月7日摘要II摘要背景背景:骨肉瘤是一種最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤，主要好發(fā)于1020歲的青少年。上世紀(jì)70年代以前，無轉(zhuǎn)移的骨肉瘤患者主要治療為截肢，5年生存率不足20％。隨著新輔助化療的引入和外科技術(shù)的逐漸提高，使骨肉瘤患者的長期生存率提高至60％。但此后骨肉瘤的治療一直停滯不前，其中重要的原因是骨肉瘤細(xì)胞對化療藥物的抵抗

3、。增強骨肉瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性已經(jīng)成為研究的熱點。2000年線粒體Smac蛋白的發(fā)現(xiàn)為腫瘤的治療指引了一個新的方向。Smac蛋白可以抑制凋亡抑制蛋白IAPs與Caspase結(jié)合，從而促進細(xì)胞凋亡。SM164是人工合成的小分子Smac模擬物，能模擬Smac蛋白與IAPs結(jié)合，促進cIAP1的快速降解和有效地干擾XIAP與Caspase9和Caspase37的結(jié)合。目的目的:本研究旨在評價SM164在人骨肉瘤HOS細(xì)胞中的化療增敏作用，

4、探討SM164化療增敏的作用機制。方法方法：(1)MTT法檢測單獨使用多柔比星和SM164聯(lián)合多柔比星對人骨肉瘤HOS細(xì)胞生長增殖的抑制。實驗分為六組：對照組、SM164組、ADM(0.25μgml)組、SM164ADM(0.25μgml)組、ADM(0.5μgml)組、SM164ADM(0.5μgml)組；SM164的工作濃度為200nM。培養(yǎng)條件：藥物處理2h后換新培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。(2)蛋白印跡法檢測單獨使用多柔比星和SM16

5、4聯(lián)合多柔比星對人骨肉瘤HOS細(xì)胞cIAP1、XIAP的影響。(3)PCR檢測單獨使用多柔比星及SM164聯(lián)合多柔比星對人骨肉瘤HOS細(xì)胞XIAP基因表達的影響。結(jié)果結(jié)果：(1)MTT實驗顯示SM164（200nM）組細(xì)胞生長的抑制率為（3.650.78）%，單獨使用ADM（0.25μgml、0.5μgml）組，HOS細(xì)胞生長的抑制率分別為（12.44.57）%、（28.434.04）%。SM164（200nM）聯(lián)合ADM（0.25μg

6、ml、0.5μgml）組，HOS細(xì)胞生長的抑制率分別為（19.44.58）%、（44.173.51）%，Q值分別為1.260.06、1.410.05。在單獨ADM組，0.5μgml組比0.25μgml組的HOS細(xì)胞生長的抑制率明顯增高，SM164聯(lián)合ADM組比單獨使用相同濃度的ADM組的HOS細(xì)胞生長的抑制率亦明顯增高。(2)蛋白印跡實驗顯示：①單獨使用ADM（0.25μgml、0.5μgml）組與對照組XIAP蛋白的表達水平無明顯差異