犬乳腺腫瘤細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定.pdf

1、乳腺腫瘤是犬貓最常發(fā)的腫瘤性疾病之一,犬乳腺腫瘤與人類的乳腺腫瘤在組織病理學(xué)和生物學(xué)上有相似的病理特征。如不考慮壽命等因素,犬乳腺腫瘤和人類乳腺腫瘤在腫瘤的發(fā)生年齡上也十分相似。由于犬作為人們喜愛(ài)的寵物,與人們生活在一起,與人們有著相似的生活環(huán)境和飲食習(xí)慣,接觸的致癌物質(zhì)相似。因此,犬乳腺腫瘤可以作為研究人類乳腺腫瘤的理想動(dòng)物模型。腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是研究細(xì)胞癌變的機(jī)理機(jī)制、腫瘤的分子生物學(xué)特征和抗癌藥物篩選的重要基礎(chǔ)技術(shù)。因此,本實(shí)驗(yàn)在

2、此基礎(chǔ)上進(jìn)行了以下工作:
　　1.犬乳腺腫瘤組織的采集、病理學(xué)診斷與分類
　　參照WHO新發(fā)布的犬乳腺癌分類分級(jí)方法,通過(guò)切片的HE染色方法對(duì)臨床收集的52例犬乳腺腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)診斷。結(jié)果顯示在52例犬乳腺腫瘤中,良性乳腺腫瘤有20例,占總病例的38.5％,惡性乳腺腫瘤有32例,占總數(shù)的61.5%,本試驗(yàn)為犬乳腺腫瘤組織的消化、細(xì)胞的分離與培養(yǎng)、細(xì)胞的傳代和鑒定奠定了基礎(chǔ)。
　　2.犬乳腺腫瘤組織中ZNF703定量

3、測(cè)定試驗(yàn)
　　通過(guò)real-time PCR技術(shù)對(duì)8例正常犬乳腺組織、20例犬良性乳腺腫瘤組織、32例犬惡性乳腺腫組織mRNA中ZNF703(鋅指蛋白)的表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示:不同犬乳腺腫瘤組織中ZNF703基因的平均表達(dá)量差異性很大。其中在8例正常乳腺組織樣本中的表達(dá)量為3.07-19.06;在20例良性犬乳腺腫瘤組織樣本中的表達(dá)量為10.85-43.16;在32例惡性犬乳腺腫瘤組織樣本中的表達(dá)量為9.43-253.39。正

4、常乳腺組織與良性乳腺腫瘤組織和惡性乳腺腫瘤組織ZNF703表達(dá)量均差異極顯著(p<0.01),良性乳腺腫瘤組織與惡性乳腺腫瘤組織ZNF703表達(dá)量差異也極顯著(p<0.01)。本試驗(yàn)結(jié)果為犬乳腺腫瘤組織的分子生物學(xué)診斷和分類提供新的參考方法。
　　3.犬乳腺腫瘤細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和篩選試驗(yàn)
　　通過(guò)犬乳腺腫瘤細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和篩選試驗(yàn),篩選和培養(yǎng)出11株犬乳腺上皮腫瘤細(xì)胞株,其傳代次數(shù)在10次以上,其中一株傳代次數(shù)超過(guò)38代(

5、CB-23),該試驗(yàn)為后續(xù)試驗(yàn)奠定了初步基礎(chǔ)。
　　4.犬乳腺腫瘤CB-23細(xì)胞株的鑒定試驗(yàn)
　　按照腫瘤細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn),分別對(duì)CB-23細(xì)胞株進(jìn)行了生長(zhǎng)曲線圖的繪制,染色體數(shù)目分析,克隆形成試驗(yàn),乳腺癌特異性抗體CA15-3的檢測(cè),動(dòng)物接種成瘤等五方面的鑒定試驗(yàn)。結(jié)果顯示該乳腺腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)快,倍增時(shí)間短,染色體平均為97條,比正常犬的染色體78條(39對(duì))數(shù)目要多,單個(gè)細(xì)胞的克隆形成率高,乳腺癌特異性抗體CA15-3呈強(qiáng)

6、陽(yáng)性表達(dá),小白鼠腫瘤細(xì)胞接種試驗(yàn)的成瘤率100%。通過(guò)鑒定說(shuō)明,培養(yǎng)的該犬乳腺腫瘤細(xì)胞株符合犬乳腺惡性腫瘤的特性,對(duì)其繼續(xù)培養(yǎng),有望建立犬乳腺腫瘤細(xì)胞系。本試驗(yàn)為開(kāi)展癌變機(jī)理和抗癌藥物的篩選等研究奠定了初步的基礎(chǔ)。
　　5.犬惡性乳腺腫瘤組織中ZNF703含量與分離細(xì)胞株培養(yǎng)效果相關(guān)性的分析研究
　　通過(guò)致癌基因ZNF703表達(dá)量與犬惡性乳腺腫瘤細(xì)胞株培養(yǎng)效果與傳代時(shí)間的相關(guān)性的分析結(jié)果顯示:癌組織中的ZNF703表達(dá)量相對(duì)