利用組織工程技術(shù)體外構(gòu)建氣管上皮組織的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)以培養(yǎng)氣管上皮細(xì)胞(epithelialcell)、成纖維細(xì)胞(Fibroblast)種子細(xì)胞為基礎(chǔ)，簡(jiǎn)化常規(guī)氣管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)方法，建立更簡(jiǎn)單、易行的種子細(xì)胞培養(yǎng)方法。種子細(xì)胞體外擴(kuò)增后利用膠原將氣管上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞在體外構(gòu)建活性氣管上皮組織，形成組織工程氣管上皮組織。 研究方法：比較不同的常規(guī)分離培養(yǎng)方法在培養(yǎng)氣管上皮細(xì)胞中的異同。 簡(jiǎn)化常規(guī)分離培養(yǎng)方法，同時(shí)分離氣管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞，共同培

2、養(yǎng)，根據(jù)兩種細(xì)胞對(duì)胰酶濃度耐受性不同的特性，分離氣管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線與MTT檢測(cè)分析觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，并與常規(guī)方法培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行比較。體外培養(yǎng)氣管上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞數(shù)量分別達(dá)到1×106個(gè)、1×108個(gè)后，將成纖維細(xì)胞接種到Ⅰ型膠原中培養(yǎng)2d，將氣管上皮細(xì)胞消化下來(lái)后，復(fù)合于構(gòu)建的膠原表面，共同培養(yǎng)7d，取出膠原用格柵法氣液雙相法進(jìn)行培養(yǎng)2w后，行組織學(xué)檢查。 研究結(jié)果：(1)Dispase冷消化法得到

3、的細(xì)胞數(shù)量(381780±580)較其他方法得到的少(P＜0.05)，其他五種方法得到的細(xì)胞數(shù)量(430600±628)vs(430780±581)vs(430900±200)vs(430740±730)vs(430580±672)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。兩步酶冷消化法及Dispase冷消化法較其它四種方法得到的氣管上皮細(xì)胞純度高，細(xì)胞狀態(tài)好。(2)用不同濃度胰酶消化后可完全分離氣管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞，分離后的細(xì)胞與常規(guī)方法培養(yǎng)

4、的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線一致，MTT檢測(cè)細(xì)胞增值活性不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。(3)體外構(gòu)建氣管上皮組織，組織學(xué)切片示成纖維細(xì)胞構(gòu)成的薄層結(jié)締組織上有氣管上皮細(xì)胞形成的上皮細(xì)胞層。 研究結(jié)論：(1)兩步酶冷消化法所獲得的細(xì)胞純度高、細(xì)胞成活率高、細(xì)胞數(shù)量多，是一種較好的體外的種子細(xì)胞(氣管上皮細(xì)胞)獲得方法。(2)新的分離培養(yǎng)方法較常規(guī)方法簡(jiǎn)單、易行，是一種較好的體外一次獲得兩種細(xì)胞的方法(3)利用膠原成功地在體外將氣管上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞復(fù)合，