組織工程技術構建兔角膜基質、上皮組織初步探索.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學博士學位論文組織工程技術構建兔角膜基質、上皮組織初步探索姓名：胡曉潔申請學位級別：博士專業(yè)：整形外科學指導教師：曹誼林2003.4.1組織工程技術構建兔角膜基質、上皮組織初步探索中文摘要目的角膜移植是臨床角膜盲唯一可靠、有效的治療手段。角膜供體匱乏限制了角膜移植手術的開展。為解決臨床角膜移植供體匱乏，我們進行了組織工程技術構建兔角膜上皮組織和角膜基質組織的探索。材料與方法1應用組織工程技術構建角膜基質組織11分離獲取新生

2、兔角膜基質細胞，擴增、培養(yǎng)。收集原代培養(yǎng)7天的新生兔角膜基質細胞，以107Iral的濃度50pl接種于聚羥基乙酸，培養(yǎng)一周，進行掃描電鏡(sEM520)觀察。體外繼續(xù)培養(yǎng)，于第2、3和B周取材，組織學觀察和透射電鏡觀察。12細胞一生物材料復合物體外培養(yǎng)一周后，植入Balb／c裸鼠皮下。將正常角膜組織植入裸鼠皮下對側位置作為對照組。術后第2、4和6周取材，組織學觀察，測定第6周新生組織和正常的角膜組織膠原纖維直徑。13角膜基質細胞聚羥基乙

3、酸復合物植入母兔角膜基質層內，術后持續(xù)觀察8周。同時，對側眼采用與實驗組相同的手術方法在角膜基質層內植入單純的聚羥基乙酸，為對照組。術后第3、6和8周取材，組織學觀察。第8周，新生組織行透射電鏡觀察，測定組織膠原纖維直徑。14構建攜帶EGFP基因的重組逆轉錄病毒載體PLNCX2一EGFP，轉染PT67包裝細胞，收集其病毒液，轉染新生兔角膜基質細胞。將轉染PLNCX2EGFP后的角膜基質細胞一聚羥基乙酸復合物植入母兔角膜基質層內，構建角膜