應用組織工程技術構建復合層兔角膜組織的實驗研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學碩士學位論文應用組織工程技術構建復合層兔角膜組織的實驗研究姓名：王愛麗申請學位級別：碩士專業(yè)：整形外科學指導教師：劉偉20040401上海第=醫(yī)科大學2001級碩士畢業(yè)論文應用組織工程技術構建復合層兔角膜組織的實驗研究中文摘要目的：角膜病變是導致失明的常見原因，目前臨床上唯一可靠、有效的治療方法是角膜移植。角膜供體來源缺乏和免疫排斥反應是限制角膜移植手術開展的兩大難題。組織工程技術的興起和發(fā)展為解決上述問題提供了一條可行

2、的新途徑。組織工程化角膜的研究，開展至今已取得了長足的進步。從以往的體外單層組織構建的基礎上，正逐漸向三維體系的多層結構深入。種子細胞來源的研究也日益受到關注。本課題以角膜緣上皮干細胞和角膜基質細胞為研究基礎，應用組織工程學的技術方法，結合以往的研究成果，尋找一種構建復合層角膜組織的有效方法。方法：1)角膜緣上皮于細胞的培養(yǎng)、擴增及鑒定沿兔角膜緣上側于顯微鏡下分離切取l4mm角膜緣上皮組織，消化法獲得角膜緣上皮細胞，接種于絲裂霉素處理過

3、的3T3飼養(yǎng)層細胞上培養(yǎng)及擴增。觀察克隆形成情況及細胞形態(tài)以及超微結構；進行克隆分析及克隆形成率的測定；用免疫組化及免疫熒光的方法檢測角蛋白K3、p63、PCNA等角膜上皮干細胞及成熟細胞特異性標記物的表達；用WesternBlotting的方法，從蛋白水平檢測各標記物的表達情況。應用端粒酶活性檢測法比較角膜緣上皮干細胞與中央上皮細胞的端粒酶活性。2)角膜基質細胞培養(yǎng)擴增及檢測手術顯微鏡下解剖分離角膜基質組織，酶消化法獲得細胞，體外培養(yǎng)