應(yīng)用組織工程技術(shù)構(gòu)建口腔粘膜實驗研究.pdf

1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文應(yīng)用組織工程技術(shù)構(gòu)建口腔粘膜實驗研究姓名：王海燕申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)（口腔內(nèi)科學(xué)）指導(dǎo)教師：周曾同20050401海第二醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文(2005)《戍用組織T程技術(shù)構(gòu)建人口腔黏膜的實驗研究》中文摘要目的：1應(yīng)用組織工程技術(shù)，探討研制一種適合臨床應(yīng)用的組織工程化1：3腔黏膜；2比較三種不同支架材料PGA、膠原膜和A1]oderm在構(gòu)建組織工程化口腔黏膜方面的優(yōu)劣；3通過動物回植實驗觀察組織

2、工程化口腔黏膜的體內(nèi)存活及生長情況；方法：體外培養(yǎng)、擴增人口腔黏膜上皮細胞和成纖維細胞，通過細胞形態(tài)學(xué)和免疫組織化學(xué)染色法等對細胞進行定性研究，通過對細胞生長曲線的測定了解細胞生長基本規(guī)律及其增殖能力：倒置顯微鏡和電鏡動態(tài)觀察口腔黏膜成纖維細胞與PGA的粘附生長及基質(zhì)分泌情況：MTT法繪制有無PGA時成纖維細胞生長曲線，并比較兩者差別，研究PGA與口腔黏膜成纖維細胞的生物相容性；將口腔黏膜細胞分別與三種不同支架材料PGA、膠原膜和All

3、oderm復(fù)合，液面下培養(yǎng)4—7天后，升至液一氣平面培養(yǎng)7天，光鏡、電鏡下進行大體組織形態(tài)及超微結(jié)構(gòu)觀察；分別將以PGA和Alloderm為支架構(gòu)建的組織工程化口腔黏膜回植免疫缺陷鼠——裸鼠背部皮下，形態(tài)學(xué)觀察上皮和固有層變化情況。結(jié)果：采用兩次消化法——中性蛋白酶消化分離口腔黏膜上皮層和固有層、胰蛋白酶消化分離上皮層獲得單個口腔黏膜上皮細胞，角蛋白免疫組化染色陽性，細胞可傳6—7代，存活40—50天，組織塊法獲得口腔黏膜成纖維細胞，波

4、形蛋白免疫組化染色陽性，細胞可傳50代以上；口腔黏膜成纖維細胞與PGA復(fù)合培養(yǎng)后生長良好，基質(zhì)分泌旺盛，生長曲線顯示增殖時段延長，未復(fù)合培養(yǎng)的細胞增殖相對緩慢，第六天開始進入平臺期；以PGA為支架構(gòu)建的組織工程化人口腔黏膜，含類似上皮層和固有層，上皮層有分層及角化現(xiàn)象，但細胞層次不清，可觀察到角化珠形成；口腔黏膜上皮細胞可在生物支架材料膠原膜上粘附生長，并可形成復(fù)層上皮樣組織，但無成熟的橋粒及基底膜樣結(jié)構(gòu)。膠原膜降解快，14天左右難以操