FAK基因在肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文FAK基因在肝癌增殖和轉(zhuǎn)移中的作用姓名：尹濤申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)（普外）指導(dǎo)教師：李向農(nóng)20060401徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文FAK基因在肝癌增殖轉(zhuǎn)移中的作用中文摘要(目的)利用體外化學(xué)合成siRNA技術(shù)，封閉焦點(diǎn)黏附激酶(FAK)基因翻譯過(guò)程，從而產(chǎn)生基因沉默效應(yīng)，使得肝癌細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移能力下降，進(jìn)而為肝癌的基因治療提供理論依據(jù)。(方法)根據(jù)人肝癌的FAK基因序列，設(shè)計(jì)合成含21個(gè)堿基的FAKsiRN

2、A及隨機(jī)陰性對(duì)照siRNA—co。在陽(yáng)離子脂質(zhì)體的介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞。分別于轉(zhuǎn)染后24h、48h、72h收集細(xì)胞，用半定量RTPCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后FAKmRNA表達(dá)的變化；以腫瘤細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)肝癌細(xì)胞侵襲性的變化；MTT實(shí)驗(yàn)觀察siRNA轉(zhuǎn)染對(duì)肝癌細(xì)胞活性的影響。FCM法測(cè)定FAK基因的蛋白表達(dá)。(結(jié)果)體外化學(xué)合成的siRNA通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后，能夠有效地抑制FAK的表達(dá)。轉(zhuǎn)染后半定量RTPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)AKmRNA的表

3、達(dá)在轉(zhuǎn)染24h有降低，48h抑制作用最為明顯，72h抑制作用較48h時(shí)減弱。MTT試驗(yàn)結(jié)果顯示，siRNA轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞的活性受到明顯抑制(p0叭)。腫瘤細(xì)胞侵襲試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞侵襲能力減弱，轉(zhuǎn)染48h后最明顯。FCM法測(cè)定FAK基因的蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后肝癌細(xì)胞中FAK基因的蛋白表達(dá)明顯降低(pO01)。(結(jié)論)FAKsiRNA可特異性抑制肝癌細(xì)胞FAKmRNA的表達(dá)，抑制肝癌細(xì)胞的活性，降低肝癌細(xì)胞的侵襲能力，