miRNA--141調(diào)控Tiam1基因在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用機制.pdf

1、南方醫(yī)科大學2011級博士學位論文miIⅢA一141調(diào)控Tiaml基因在肝癌轉(zhuǎn)移中的作用機制ThemechanismofmiRNA一141regulatesTiamlgeneinhepatocllularcarcinomametastsis課題來源：國家自然科學基金(81101822)：廣州市科技計劃重點項目(11C26090521)學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院劉瑛陳龍華腫瘤學學術(shù)型博士研究生第一臨床學院2014年

2、4月20日廣州摘要們還構(gòu)建了Tiaml的慢病毒干擾載體，包裝慢病毒后感染高轉(zhuǎn)移肝癌細胞HCCLM6，觀察腫瘤細胞生物學特性的變化，發(fā)現(xiàn)Tiaml基因表達降低后，HCCLM6細胞增殖速度明顯減慢、S期的比例明顯減少、體外運動遷移、侵襲能力均明顯降低。上述研究結(jié)果說明，Tiaml是一個重要的肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因。但目前有關(guān)Tiaml在肝癌轉(zhuǎn)移中的表達調(diào)控機制尚不清楚。MicroRNA(miRNA)是近年來研究發(fā)現(xiàn)的一類長約22nt的非編碼單鏈小

3、RNA分子，能以堿基互補形式結(jié)合到靶基因mRNA的3’UTR上，導致靶基因mRNA降解或翻譯抑制，在轉(zhuǎn)錄后水平上對基因表達進行負性調(diào)控，研究顯示miRNA可在轉(zhuǎn)錄后水平通過調(diào)控癌基因和／或抑癌基因的表達廣泛參與腫瘤細胞增殖、凋亡、分化、侵襲、遷移、血管生成等，與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后關(guān)系密切。本研究將探討參與調(diào)控Tiaml基因的miRNAs及其在肝癌侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，利用TargetScan、DIANAmicroT矛lmiRand

4、a三個經(jīng)典的miRNA靶基因預測數(shù)據(jù)庫進行相互作用miRNAs的預測，得出miR14l和miR106b為候選miRNA；采用RTPCR方法檢測了miR141、miR一106b和Tiaml蛋白在6種肝癌細胞株中的表達趨勢，初步篩選出miR141為Tiaml相互作用的miRNA；利用熒光素酶報告系統(tǒng)驗證了miR141與Tiaml的3’UTR區(qū)存在特異性結(jié)合；通過原位雜交技術(shù)檢測212例有完整隨訪資料的肝癌組織中miR141表達，結(jié)果顯示mi

5、R141低表達與患者預后密切相關(guān)，臨床參數(shù)分析顯示miR141低表達與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，單因素和多因素分析顯示miR141低表達可作為肝癌預后的預后因素，提示miR一141可作為肝癌預后判斷的重要指標，對判斷肝癌預后有重要意義；通過抑焦JJJmiR141表達后能上調(diào)低轉(zhuǎn)移潛能的MHCC97L肝癌細胞Tiaml的表達，促進肝癌細胞體外增殖、遷移及侵襲能力；轉(zhuǎn)染miR141過表達病毒后能下調(diào)高轉(zhuǎn)移潛能HCCLM3肝癌細胞內(nèi)Tiaml的表達，抑制