SUZ12在肝癌增殖及轉移中具體作用及其機制研究.pdf

1、研究背景：
　　肝癌是人類常見的惡性腫瘤之一，其致死率排惡性腫瘤第二位，外科治療是目前最常規(guī)、最被廣泛接受的治療手段，但是術后患者復發(fā)率高，生存期短，盡管隨著新的醫(yī)療手段，如射頻消融術、介入栓塞術及分子靶向藥物藥物的出現，使得肝癌的患者的生存期提高，但是肝癌治療的效果仍然不理想，肝癌侵襲轉移能力較強是導致肝癌患者生存周期短的一個重要的因素，因此對肝癌的肝癌侵襲轉移的具體機制的研究，則顯得尤為重要。
　　腫瘤的發(fā)生往往伴隨著基

2、因突變，導致抑癌基因的表達抑制，促癌基因激活，基因的突變則必然伴隨著基因結構的改變，但是近幾年隨著人們對表觀遺傳學研究的深入，發(fā)現在基因結構的不改變的情況下也就可以誘發(fā)腫瘤，即表觀遺傳修飾的改變，導致了某種基因轉錄受到抑制，基因的表觀修飾主要包括DNA甲基化及去甲基化、組蛋白乙酰化及去乙?；确矫妫碛^遺傳學為腫瘤的研究及治療提供新的方向，在胃癌、腸癌等消化系統(tǒng)實體腫瘤中發(fā)現，表觀遺傳改變可以導致基因的染色體組的不穩(wěn)定性，進而促進了腫瘤

3、的形成，針對表觀遺傳修飾改變，也開發(fā)出相關藥物，療效顯著，因此進一步研究表觀遺傳修飾在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中具體的作用則顯得尤為重要。
　　SUZ12是PRC2復合體的亞基，PRC2這在表觀遺傳的修飾中占有重要的作用，可以調節(jié)組蛋白H3的27位點上的酪氨酸三甲基化，PRC2可以抑制人類胚胎成纖維細胞中1000多種基因的轉錄。目前在肺癌、胃癌、結腸癌、乳腺癌發(fā)現SUZ12能促進腫瘤的增殖與侵襲轉移[1-3]在惡性膠質瘤中研究發(fā)現SUZ1

4、2基因在腫瘤中表達缺失，該基因的缺失導致腫瘤細胞轉化，具有腫瘤細胞特性[4,5]。目前研究發(fā)現SUZ12在乙肝相關性肝癌中，隨著HBV的復制，PX的作用下SUZ12與ZNF189基因表達下調，導致腫瘤干細胞標志基因BAMBI,CCND2,DKK2, DLK1,EpCAM表達上調，而在未轉染PX基因中，這些標記基因則沒有顯著差異[6]。SUZ12與ZNF198的表達下調則促進了HBX的復制與正常肝細胞向腫瘤細胞轉化。SUZ12與ZNF19

5、8的表達的下降，伴隨著HOTAIR與PLK1的表達的上調，引起組蛋白修飾的改變[7]。因此SUZ12對肝癌的發(fā)生發(fā)展的有著非常重要的意義。但是關于SUZ12對肝癌細胞的增殖、侵襲轉移的影響及其具體機制目前還不明確。
　　研究目的：
　　研究SUZ12在肝癌中表達情況，并研究其在肝癌侵襲轉移中的作用及其分子機制
　　方法：
　　1、收集肝癌標本，用western blot的方法檢查SUZ12在肝癌中的表達情況，并使

6、用統(tǒng)計學明確其相關。
　　2、購置組織芯片，使用IHC技術研究SUZ12在肝癌組織及癌旁組織中的表達情況，并研究SUZ12與腫瘤患者的術后生存期的關系，并做統(tǒng)計分析。
　　3、使用慢病毒，構建SUZ12穩(wěn)定干擾肝癌細胞株，及SUZ12穩(wěn)定過表達細胞株，使用 transwell技術檢測干擾SUZ12基因表達后，腫瘤細胞Hep3b、SMMC-7721侵襲遷移的變化，及過表達SUZ12后腫瘤細胞系Hep3b、SMMC-7721的遷

7、移與侵襲能力的變化。并使用western blot技術檢測干擾與過表達后細胞系Hep3b、SMMC-7721中的E-CADHERN、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的變化
　　4、使用MTT及EDU實驗技術檢測SUZ12干擾及過表達對肝癌細胞株Hep3b、SMMC-7721細胞株的增殖能力的影響，檢測SUZ12穩(wěn)定干擾及過表達對肝癌細胞的克隆形成的影響。
　　5、驗證ERK信號

8、通路在SUZ12缺失誘導肝癌細胞的侵襲、遷移能力變化中的作用，使用ERK信號通路抑制劑阻滯相關信號通路，檢測SUZ12穩(wěn)定干擾細胞系的侵襲與轉移的變化及相應的E-cadhern、N-cadhern、Vimatin、MMP-9、MMP-2、P-ERK1/2蛋白的變化。
　　結果：
　　30例肝癌標本中有20例患者的腫瘤組織中的SUZ12較其癌旁組織下降，組織芯片技術發(fā)現SUZ12的降低可以顯著降低腫瘤患者的術后生存周期，體外實

9、驗發(fā)現干擾SUZ12表達后肝癌細胞系的侵襲與轉移的能力顯著增強，干擾SUZ12表達后肝癌細胞系Hep3b、SMMC-7721的N-cadhern蛋白顯著降低、金屬基質酶MMP-9、MMP-2顯著升高，過表達SUZ12后則呈現相反的趨勢，干擾腫瘤細胞系Hep3b、SMMC-7721后肝癌細胞的P-ERK1/2顯著升高，使用P-ERK1/2抑制劑后SUZ12穩(wěn)定干擾細胞株的遷移、侵襲能力能夠的顯著的抑制，P-ERK1/2抑制劑能夠逆轉SUZ

10、12穩(wěn)定干擾細胞株中的N-CADHERN、金屬基質酶MMP-9、MMP-2的蛋白變化。但是在MTT實驗、EDU實驗中發(fā)現SUZ12的干擾及過表達對腫瘤細胞系Hep3b、SMMC-7721的增殖、克隆形成實驗無顯著影響
　　結論：
　　1、SUZ12在肝癌細胞中呈低表達、SUZ12的降低的肝癌患者其生存周期明顯短于SUZ12未明顯變化及SUZ12升高的患者。
　　2、SUZ12的缺失及過表達對肝癌細胞株Hep3b、SMM