MRI1基因在前列腺癌轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、隨著環(huán)境的變化，高脂飲食和人口老齡化等原因，在我國前列腺癌的發(fā)病率由2003年的6.53/10萬，上升至2009年的9.92/10萬，升高了51.91％，呈逐年上升趨勢。目前，前列腺癌根治術(shù)被視為器官局限性前列腺癌局部治療的金標(biāo)準(zhǔn)。此外還有內(nèi)分泌治療、化療以及放療。前列腺癌早期并無明顯的臨床癥狀，前列腺癌的診斷主要依靠前列腺特異性抗原PSA(prostate-specific antigen，PSA)和直腸檢查(digital rect

2、al examination，DRE)的檢查方法。局限性的前列腺癌患者5年生存率幾乎可達(dá)100％，但當(dāng)發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移后其生存率可下降為29％，其一旦發(fā)生不僅影響預(yù)后且影響著病人的生活質(zhì)量。
　　腫瘤的轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征之一，近年來，惡性腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移影響患者的預(yù)后與治療，大多數(shù)患者并非是死于原發(fā)腫瘤，而是死于腫瘤轉(zhuǎn)移后所形成的轉(zhuǎn)移癌。隨著人們對與腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的不斷深入研究，發(fā)現(xiàn)了Ras(Ras superfamily

3、，Ras)和Myc基因家族(myelocytomatosis viral oncogene，Myc)和突變型P53基因(protein53，P53)的異常表達(dá)可能和腫瘤的轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。另外，有研究證明，如果把很多癌基因轉(zhuǎn)染成恰當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞則可以誘發(fā)轉(zhuǎn)移表型的生成。在對Rho(Ras homolog gene family，Rho)家族逐漸深入的研究中，一種名為“依賴RhoA（Ras homolog gene family，member

4、A，RhoA）的侵襲媒介”（Mediator of RhoA-dependent invasion，MRI1）的未被鑒定基因，又稱其為MRI1基因。從未在人類特征數(shù)據(jù)具有明顯的特點，它經(jīng)常被認(rèn)為是一個假設(shè)蛋白質(zhì)。它的命名基于其響應(yīng)于RhoA的感應(yīng)并具有促進依賴RhoA細(xì)胞侵襲和細(xì)胞運動的特征，并且為RhoA的FAK(Focal Adhesion Kinase，F(xiàn)AK)的酪氨酸磷酸化的調(diào)節(jié)提供了一種新的方法。其具有雙重功能，一個是其具有催

5、化活性，另一個是其作為一個效應(yīng)信號參與癌細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。以往的研究顯示，MRI1基因可能與惡黑、卵巢癌、乳腺癌等腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。但是其與前列腺癌的關(guān)系如何，國內(nèi)外以往的報道較少。
　　目的:
　　本研究中我們檢測對前列腺癌細(xì)胞、沉默MRI1基因后前列腺癌細(xì)胞中的MRI1基因及其對應(yīng)蛋白表達(dá)情況。并通過細(xì)胞轉(zhuǎn)染，觀察沉默MRI基因后對前列腺癌細(xì)胞細(xì)胞遷移力的影響，探討MRI1基因在前列腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移中的作用。
　　材料方

6、法:
　　1、研究對象:人前列腺癌細(xì)胞系——PC3(protate cancer cell3，PC3)，購自ATCC(American type culture collection)，細(xì)胞用含10％胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液在37℃、5％CO2及飽濕度條件下培養(yǎng)。
　　2、實驗分組:分為三組，第1組為空白對照組（CTL組）為不做任何處理的前列腺癌細(xì)胞，第2組為陰性對照組(NC組)為加入慢病毒空載體轉(zhuǎn)染，第3組為實驗組

7、（sh-1、sh-2、sh-3、sh-4、sh-5組）特異性沉默MRI1基因。
　　3、實驗方法:采用慢病毒載體來特異性靶向沉默MRI1基因的表達(dá)，利用實時熒光定量PCR技術(shù)及western blot檢測前列腺癌細(xì)胞中MRI1基因及蛋白表達(dá)情況。并運用劃痕實驗檢測前列腺癌細(xì)胞和沉默MRI1基因后前列腺癌細(xì)胞的遷移能力。
　　4、數(shù)據(jù)處理:應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，各不同處理后的前列腺癌細(xì)胞中的MR I1基因的相對表達(dá)值，

8、采用獨立樣本的T檢驗進行分析，比較各組前列腺細(xì)胞遷移能力水平，采用方差分析。檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1.實時定量PCR結(jié)果顯示，MRI1基因在前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)，實驗組中MRI1基因沉默有效，與CTL組相比MRI1基因的表達(dá)出現(xiàn)明顯的下降(P＜0.05)。
　　2.蛋白印跡結(jié)果表明:內(nèi)參蛋白Vinculin條帶整齊，表明所有樣本蛋白濃度是一致的。與兩對照組蛋白表達(dá)相比，實驗組蛋白表達(dá)明顯降低。