外源性VEGF對(duì)自體移植脾組織血管再生的影響.pdf

1、目的:觀察外源性VEGF對(duì)自體脾組織大網(wǎng)膜內(nèi)移植后血管再生過程及組織結(jié)構(gòu)重建的影響,探討應(yīng)用外源性VEGF促進(jìn)自體脾組織移植后血管再生與結(jié)構(gòu)重建的可能性及其作用機(jī)制,為VEGF用于自體移植脾組織的實(shí)驗(yàn)研究和臨床應(yīng)用提供理論參考依據(jù).方法:216只昆明種小白鼠隨機(jī)分為脾切除自體脾組織大網(wǎng)膜內(nèi)移植組及假手術(shù)組,將脾切除自體脾組織大網(wǎng)膜內(nèi)移植后的小鼠再隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)觀察組(應(yīng)用外源性VEGF組) 和對(duì)照組(不用外源性VEGF組) .實(shí)驗(yàn)觀察組小

2、鼠分別于術(shù)后7、15、30、60 d于尾靜脈內(nèi)注射VEGF,注射后7、14、30、60、90 d各處死3只,取脾組織標(biāo)本;對(duì)照觀察組和假手術(shù)組分別于術(shù)后于上述對(duì)應(yīng)時(shí)相點(diǎn)各處死3只,取脾組織標(biāo)本,進(jìn)行下列研究:(1)組織學(xué)觀察按照光鏡、電鏡常規(guī)要求分別制作光鏡和電鏡切片,在光鏡和電鏡下觀察各組標(biāo)本的組織學(xué)特征;(2) 血管面密度測定 經(jīng)小鼠左心室主動(dòng)脈插管右心房開窗灌洗后,同等壓力下灌注墨汁混懸液,靜置30 min后取脾組織制片,應(yīng)用計(jì)算

3、機(jī)圖象分析系統(tǒng)測定血管面積密度;(3) KDR的檢測 應(yīng)用免疫組化染色方法,結(jié)合圖象分析測定自體移植脾組織KDR陽性細(xì)胞密度;(4) KDR mRNA檢測 采用組織原位雜交技術(shù),觀測自體移植脾組織中KDR mRNA的表達(dá).結(jié)果:(1) 組織學(xué)觀察①術(shù)后7、15、30 d注射VEGF組注射VEGF后較對(duì)照組的血管數(shù)量明顯增多,脾小體、中央動(dòng)脈及其周圍淋巴鞘的數(shù)量也增多,面積增大,最終形成了較完整的白髓、邊緣區(qū)、紅髓結(jié)構(gòu),纖維組織數(shù)量較對(duì)照

4、組少.②術(shù)后60 d注射VEGF組注射VEGF后與對(duì)照組各時(shí)相點(diǎn)的組織學(xué)特征沒有明顯差別.(2) 血管面密度測定①術(shù)后7、15、30 d注射VEGF組墨汁灌注顯示血管數(shù)量及面密度實(shí)驗(yàn)觀察組較對(duì)照組明顯增多.②術(shù)后60 d注射VEGF組血管數(shù)量與對(duì)照組比較沒有明顯差別.(3) KDR的檢測 ①術(shù)后7、15、30 d注射VEGF組KDR面積密度值高于對(duì)照組.②術(shù)后60 d注射VEGF組 KDR面密度值與對(duì)照組比較無顯著差別.(4) KDR

5、mRNA檢測 ①術(shù)后7、15、30 d注射KDR mRNA表達(dá)陽性細(xì)胞密度高于對(duì)照組.②術(shù)后60 d注射VEGF組KDR mRNA表達(dá)陽性細(xì)胞密度與對(duì)照組比較沒有明顯差異.結(jié)論:(1) 外源性VEGF能夠促進(jìn)移植脾組織內(nèi)血管生長,改善移植脾組織的血液循環(huán),有利于移植脾組織再生,使其結(jié)構(gòu)恢復(fù)更趨完善;(2) 自體脾組織移植術(shù)后7-15 d開始靜脈應(yīng)用VEGF是促進(jìn)血管再生的較理想時(shí)間;(3) 外源性VEGF可能是通過與移植脾組織內(nèi)所表達(dá)的