腸產(chǎn)毒性大腸桿菌檢測基因芯片的研制.pdf

1、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(Enterotoxigenic Eschericbia coli，ETEC)是引起發(fā)展中國家嬰幼兒腹瀉以及熱帶或亞熱帶地區(qū)旅游者腹瀉的主要病原菌。它通過釋放腸毒素，引起人體腸液分泌紊亂，有時導致代謝性酸中毒、高血鉀癥和心力衰竭等并發(fā)癥，嚴重危害人們的健康。因此，建立一種快速、準確的。ETEC檢測技術是當前腸道感染疾病的診斷、治療和監(jiān)控等工作迫在眉捷的需要。
　　 腸產(chǎn)毒性大腸桿菌的常見的血清群有O6、O8、O1

2、1、O15、O25、O27、O78、O85、O114、O115、O126、O128、O139、O148、O149、159、O166、O167、O173等19種；事實上，細菌需表達LT、STp、STh、STb等四種腸毒素的至少一種才可被鑒定為是ETEC。本文通過對以上19個不同O血清群大腸桿菌各自所特異的寡糖單位處理酶基因wzx及wzy(或wzt、wzm基因)、以及對ETEC所特有四種腸毒素編碼基因elt、estA(h)、estA(p)、

3、estB基因分別設計寡核苷酸探針，利用基因芯片檢測技術對ETEC菌株進行O血清群分群和毒素鑒定。經(jīng)過反復篩選驗證得到的特異探針有48條，熒光定位探針1條，以細菌16S rRNA基因為靶序列設計的的正對照探針1條，以及由多聚T構成的負對照探針1條，共計51條。而在靶基因的擴增環(huán)節(jié)，本文采用的是全基因組隨機引物PCR法，先后只用兩條引物便可完成對細菌DNA進行全基因組范圍的擴增，有效克服了在Multiplex PCR中不可避免的引物相互干擾