致瀉性大腸桿菌檢測基因芯片的研制.pdf

1、致瀉性大腸桿菌引起的腹瀉疾病嚴重危害人類健康。為了預(yù)防致瀉性大腸桿菌的感染，快速而準確地檢測致瀉性大腸桿菌是關(guān)鍵的技術(shù)基礎(chǔ)之一。
　　 基因芯片是一種可以對核酸分子進行平行和高通量檢測的技術(shù)，本文以食品中常見的四種致瀉性大腸桿菌和危害嚴重的大腸桿菌O157為檢測對象研制了病原菌檢測用基因芯片。本文通過對毒力基因和表面抗原基因簇的分析，確定用于致瀉性大腸桿菌檢測的靶基因基因；用Oligoarray軟件分別設(shè)計出特異探針，同時設(shè)計了

2、所有通用探針和陰性對照探針，將探針加尾后固定在載玻片上，制成寡核苷酸芯片；提取大腸柑橘年基因組DNA后采用多重PCR的方法進行擴增，純化擴增產(chǎn)物去除引物，用下游引物進行單鏈多重PCR，同時摻入Cy3_dUTP標記反義鏈，熒光標記后的產(chǎn)物和寡核苷酸芯片上的探針雜交，洗滌后用熒光掃描儀檢測雜交信號。
　　 總計用176株菌進行了芯片性能評價，篩選得到了24條特異檢測。完成了芯片的特異性、靈敏度、雜菌干擾試驗和模擬樣品試驗，同時做了1