奶粉中常見致病菌檢測的基因芯片的研制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、食品中常見的致病菌是引起食物中毒的主要原因之一，可導致多種疾病發(fā)生，嚴重威脅著人們的健康?？焖?、準確的檢測食品中的致病菌是有效預防和控制病原菌感染的前提條件。本文的研究目的是建立一種利用寡核苷酸芯片快速檢測奶粉中常見致病菌的方法，檢測的目的菌株包括坂崎腸桿菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、產酸克雷伯氏菌、沙門氏菌和志賀氏菌。
　　 我們通過對坂崎腸桿菌、化膿性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、產酸克雷伯氏菌、沙門氏菌16S-23S rDN

2、A間區(qū)以及志賀氏菌的ipaH基因的分析，確定用于檢測的靶基因為16S-23S rDNA間區(qū)和ipaH基因。在16S rDNA的末端和23S rDNA的前端設計通用引物，而在間區(qū)可變區(qū)設計特異性探針。用Primer premier5.0軟件分別設計出6種致病菌的特異探針，同時設計了所有細菌的正對照探針及陰性對照探針，將探針poly（T）加尾后固定在載玻片上，制成寡核苷酸芯片；提取細菌DNA后PCR擴增，純化擴增產物去除引物，用下游引物進行

3、單鏈PCR，同時摻入Cy3_dUTP標記反義鏈，熒光標記后的產物和寡核苷酸芯片上的探針雜交，洗滌后用熒光掃描儀檢測雜交信號。對檢測體系進行了特異性、靈敏性及模擬樣品實驗。
　　 通過148株菌包括104株代表菌株和39臨床菌株對檢測體系進行了測試，均顯示了該寡核苷酸芯片的高特異性；該方法可最低檢測出103CFU/mL的純菌。實驗結果表明運用寡核苷酸芯片技術所建立的檢測方法準確、可靠、實用性強，本文所建立的檢測方法為今后在食源性致

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