鴨源大腸桿菌ESBL-,S-的基因型檢測.pdf

1、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）是一類由細菌質(zhì)粒介導(dǎo)的，能水解氧亞氨基β-內(nèi)酰胺類抗菌藥如：頭孢噻肟、頭孢他啶、頭孢曲松等三代頭孢菌素和氨曲南等單環(huán)酰胺類抗菌藥的β-內(nèi)酰胺酶，可被β-內(nèi)酰胺酶抑制劑如克拉維酸所抑制。ESBLs主要由革蘭陰性菌，如大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、粘質(zhì)沙雷、變形桿菌等產(chǎn)生，是細菌對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥產(chǎn)生耐藥性的主要原因。已發(fā)現(xiàn)的ESBLs已經(jīng)超過400多種，且新基因型種類在不斷增加。按照Bradford的分類方法

2、，ESBLs可分為TEM、CTX-M、SHV、OXA和其它五種類型。目前，隨著大量抗菌藥的使用，動物也出現(xiàn)了不同程度的耐藥及多重耐藥現(xiàn)象，其中菌株產(chǎn)ESBLs是耐藥的重要原因之一。 本文針對40株臨床分離的鴨大腸桿菌，用CLSI推薦的ESBLs初篩、確證試驗方法、雙紙片協(xié)同法進行ESBLs檢測，用標準微量兩倍稀釋法及K-B紙片法檢測其對抗菌藥的敏感性。利用分子生物學方法對臨床分離產(chǎn)ESBLs大腸桿菌進行基因型、基因亞型的檢測。

3、 檢測結(jié)果表明，40株鴨大腸桿菌其中有18株菌產(chǎn)ESBLs，檢出率為45％。藥敏結(jié)果顯示，臨床分離菌株中除碳青酶烯類藥物（亞胺培南）對產(chǎn)ESBLs菌株和非產(chǎn)ESBLs菌株均無影響，敏感率均為100％之外，產(chǎn)ESBLs大腸桿菌對其它21種抗菌藥的耐藥率為17％～100％，非產(chǎn)ESBLs的對這21種抗菌藥的耐藥率明顯低于產(chǎn)ESBLs。多種抗菌藥聯(lián)合用藥時，產(chǎn)ESBLs菌株MIC值均有大幅度降低。產(chǎn)ESBLs菌株除了對β-內(nèi)酰胺類抗菌藥

4、產(chǎn)生耐藥性外，對多種抗菌藥表現(xiàn)出多重耐藥性和交叉耐藥性，例如氨基糖苷類、喹諾酮類、氯霉素類。β-內(nèi)酰胺類抗菌藥與β-內(nèi)酰胺酶抑制劑或其它類抗菌藥聯(lián)用均可明顯提高產(chǎn)ESBLs菌對藥物的抗菌活性。 18株產(chǎn)ESBLs大腸桿菌分別用TEM、CTX-M、SHV、OXA型四對引物進行擴增，其中861bpTEM型為18株、905bpCTX-M型為12株、831bpOXA型為9株、SHV型引物未擴增出目的片段。同時攜帶有TEM和CTX-M的菌

5、株為12株，攜帶TEM和OXA的菌株為9株，同時攜帶TEM、CTX-M和OXA的菌株為3株。PCR產(chǎn)物經(jīng)克隆后測序，結(jié)果表明，TEM型臨床分離菌之間的同源性為99.8％～100％，已提交序列FJ405215與GeneBank上公布AY293072（TEM-1）序列同源性為99.9％，核苷酸序列中有兩個突變點，但沒有引起氨基酸位點的突變，所以仍屬于TEM-1型廣譜酶。CTX-M型臨床分離菌之間的同源性為99.9～100％，與已提交序列FJ