脊髓損傷即刻清除出血灶的研究.pdf

1、世界范圍內(nèi)約有300萬(wàn)脊髓損傷（spinalcordinjury,SCI）患者，我國(guó)以每年兩萬(wàn)人的速度遞增。SCI能夠?qū)е禄颊呓K生殘疾，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量和生活預(yù)期，加重患者、家庭和社會(huì)負(fù)擔(dān)。努力找到脊髓損傷的治療措施，提高治愈率,減輕患者痛苦，提高其生活質(zhì)量，一直是神經(jīng)科學(xué)研究面臨的重要課題之一。中樞神經(jīng)組織內(nèi)部血管豐富，受到機(jī)械外力損害時(shí)不可避免地伴隨不同程度出血。出血，作為SCI原發(fā)損傷的主要后果，對(duì)隨后的病理變化有重要影響。

2、大量直接或間接的證據(jù)提示了出血對(duì)脊髓組織的損害作用(Nobleetal.,1989;Bullocketal.,1992)。臨床上，Tachibana等在1984年曾在損傷24小時(shí)切開(kāi)患者的脊髓，清除出血及壞死組織,效果并不好(Tachibanaetal.,1984)。但這并不能說(shuō)明清除出血無(wú)效，因脊髓損傷環(huán)境受多因素綜合作用，難以分析單一因素的療效，而且我們的臨床研究證明，傷后三日內(nèi)手術(shù)效果不好(Zhuetal.,2008)。關(guān)于早期清

3、除出血對(duì)脊髓病理變化的作用至今尚無(wú)研究。以我所自行研制的多用脊髓損傷儀，采用薄板橫壓的方法建立大鼠脊髓擠壓傷模型。該模型在脊髓損傷中心形成易于術(shù)野下判斷且邊緣清晰的中心出血灶，為研究SCI后清除出血提供了良好的模型基礎(chǔ)。我們于脊髓損傷即刻吸除中心出血灶，以期闡明損傷即刻清除出血灶對(duì)于脊髓修復(fù)的作用。
　　本實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分：第一部分，在大鼠脊髓擠壓傷模型，建立吸引清創(chuàng)術(shù)以清除中心出血灶；第二部分，觀察即刻清除出血灶對(duì)損傷早期組織微

4、環(huán)境的影響；第三部分，觀察即刻清除出血灶對(duì)損傷后期病理進(jìn)展和功能恢復(fù)的影響。
　　第一部分，造大鼠脊髓擠壓傷模型，建立吸引清創(chuàng)術(shù)。當(dāng)模型建立完畢，在立體定位儀引導(dǎo)下，按一定的方式將一次性無(wú)菌注射針從脊髓背側(cè)插入出血灶，負(fù)壓吸去血液，觀察吸引清創(chuàng)術(shù)的效果。
　　結(jié)果：脊髓擠壓損傷后，損傷區(qū)充滿(mǎn)出血，形成一橫貫脊髓腹背的梭形出血灶，與吻尾端脊髓組織斷端分界清晰。至6h，該出血灶仍可見(jiàn)，至1d開(kāi)始逐漸彌散。吸引清創(chuàng)術(shù)后，中心出血灶

5、被徹底清除，至6h，未見(jiàn)新出血灶形成。結(jié)果提示，在脊髓擠壓傷模型，于損傷即刻行吸引清創(chuàng)術(shù)可清除中心出血灶，且重復(fù)性好、排血效果隨時(shí)間進(jìn)展穩(wěn)定存在。
　　第二部分，造大鼠脊髓擠壓傷模型，設(shè)為擠壓組；損傷即刻行吸引清創(chuàng)術(shù)，為損傷+吸引組。以脊髓組織水分/干重比反映水腫，以一定的方法顯示損傷旁區(qū)血流通暢的血管、阻塞/閉塞的血管以及所有殘留的血管，觀察即刻清除出血灶對(duì)組織水腫和損傷旁區(qū)血流灌注的影響。
　　結(jié)果：
　　水分/干

6、重比。正常脊髓為2.56±0.053，擠壓傷后6h和3d為兩個(gè)水腫高峰點(diǎn)，分別達(dá)到2.94±0.053和3.01±0.035；擠壓+吸引組6h和3d的含水量分別為2.81±0.047和2.88±0.065，均低于擠壓組，存在顯著性差異(P<0.05)。
　　我們應(yīng)用了三種方法觀察損傷旁區(qū)的不同血管。于傷后6h，以灌注單寧酸-氯化鐵(Ta-Fe)的方法顯示血流通暢的血管，觀察這種血管在損傷旁區(qū)的單位面積內(nèi)數(shù)量，擠壓+吸引組較擠壓組多

7、；在Ta-Fe灌注過(guò)的組織切片行大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物（RECA）熒光染色，由于Ta-Fe成分可以干擾RECA的免疫組化反應(yīng)，抗RECA抗體標(biāo)記的血管僅為T(mén)a-Fe未灌注到的血管，即阻塞/閉塞的血管，觀察這種血管在損傷旁區(qū)的單位面積內(nèi)數(shù)量，擠壓+吸引組較擠壓組少；在多聚甲醛常規(guī)灌注的組織切片行RECA熒光染色，所有殘留的血管結(jié)構(gòu)都可被標(biāo)記，包括所有血流通暢的和阻塞/閉塞的血管，觀察該種血管在損傷旁區(qū)的單位面積內(nèi)數(shù)量，兩組間未見(jiàn)顯著差異。

8、以上結(jié)果可知，即刻清除出血灶可改善損傷旁區(qū)的血流灌注，其機(jī)制為改善血管的閉塞/阻塞狀態(tài)，而不影響殘留血管結(jié)構(gòu)的總量。于傷后3d，觀察上述各種血管在損傷旁區(qū)的單位面積內(nèi)數(shù)量，兩組間無(wú)顯著差異。結(jié)果提示，即刻清除出血灶可以緩解組織水腫，并改善損傷旁區(qū)血管的閉塞/阻塞狀態(tài)進(jìn)而緩解組織缺血。
　　第三部分，造大鼠脊髓擠壓傷模型，設(shè)為擠壓組；損傷即刻行吸引清創(chuàng)術(shù)，為擠壓+吸引組。各組于傷后1d、3d、1w和2w作BBB評(píng)分(Basso,Be

9、attie,Bresnahanscale)，并在2w作形態(tài)學(xué)觀察以比較損傷范圍。
　　結(jié)果：
　　BBB評(píng)分。傷后1d和3d，兩組均無(wú)明顯恢復(fù)，組間無(wú)顯著性差異。至1w和2w，擠壓組評(píng)分分別為4.43±0.67和7.37±0.45，擠壓+吸引組分別達(dá)8.87±0.78和10.89±0.74，均高于擠壓組同時(shí)間點(diǎn)，存在顯著性差異(P<0.05)。損傷面積比較。脊髓擠壓傷后2w，損傷區(qū)范圍較6h明顯擴(kuò)大且邊緣清晰可辨，面積為2.