Lapatinib體外逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白介導(dǎo)的急性白血病細(xì)胞多藥耐藥.pdf

1、目的：觀察lapatinib能否體外逆轉(zhuǎn)P—糖蛋白介導(dǎo)的白血病MDR，探討lapatinib逆轉(zhuǎn)的可能機(jī)制，為開發(fā)新的急性白血病P—gp逆轉(zhuǎn)劑打下基礎(chǔ)。 方法：流式細(xì)胞儀檢測(cè)多藥耐藥K562/ADR細(xì)胞株及急性白血病患者細(xì)胞表面P—gp表達(dá)，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)（MTT法）觀察傳統(tǒng)化療藥物阿霉素、柔紅霉素聯(lián)合lapatinib后多藥耐藥K562/ADR細(xì)胞株及原代急性白血病細(xì)胞IC50值的變化，流式細(xì)胞儀觀察lapatinib對(duì)阿霉素和

2、羅丹明123積累以及羅丹明123流出的影響，RT—PCR和western—blot法分別在mRNA水平和蛋白質(zhì)水平觀察lapatinib對(duì)P—gp表達(dá)的影響，Western—blot法觀察lapatinib對(duì)細(xì)胞ERK1/2和AKT磷酸化的影響。 結(jié)果：⑴Lapatinib體外逆轉(zhuǎn)P—gp介導(dǎo)的MDR: MTT結(jié)果顯示：0.625，1.25，2.5μM的lapatinib與阿霉素（DOX）聯(lián)合使用時(shí)的MDR細(xì)胞K562/ADR半

3、數(shù)抑制濃度（IC50）值分別為4.182、2.826、1.644μM，分別低于無逆轉(zhuǎn)劑組8.908μM（P<0.01），與柔紅霉素（DNR）聯(lián)合使用的IC50值分別為1.628、0.746和0.269μM，也低于無逆轉(zhuǎn)劑組2.740μM（P<0.01），而且lapatinib這種逆轉(zhuǎn)作用呈濃度依賴性，2.5μM的lapatinib對(duì)DOX和DNR的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別達(dá)到5.4倍和10.2倍（P<0.01）。表明Lapatinib能明顯增加阿霉

4、素、柔紅霉素對(duì)K562/ADR細(xì)胞的毒性。另Lapatinib不會(huì)增加藥物對(duì)敏感株的毒性；Lapatinib不會(huì)增加非P—gp底物順鉑對(duì)白血病細(xì)胞的毒性；Lapatinib這種逆轉(zhuǎn)活性呈濃度依賴性。⑵Lapatinib對(duì)阿霉素和羅丹明123積累的影響結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，lapatinib可以濃度依賴性顯著增加阿霉素和羅丹明123在K562/ADR細(xì)胞內(nèi)的積累（P＜0.05），卻不能增加在敏感細(xì)胞株K562的積累，同時(shí)lapatini

5、b能明顯抑制羅丹明123從K562/ADR內(nèi)輸出（P＜0.05）。⑶Lapatinib對(duì)P-gp表達(dá)的影響RT-PCR和western-blot的結(jié)果顯示：在mRNA和蛋白質(zhì)水平lapatinib并沒有影響P-gp在K562/ADR的表達(dá)。⑷Lapatinib對(duì)白血病細(xì)胞ERK1/2和AKT磷酸化的影響western-blot結(jié)果證實(shí)lapatinib不影響細(xì)胞內(nèi)AKT和ERK1/2的磷酸化水平。⑸Lapatinib在體外對(duì)原代急性白血

6、病MDR細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)和對(duì)羅丹明123積累的影響結(jié)果顯示：與對(duì)照組比較，Lapatinib可以顯著提高過表達(dá)P-gp的原代急性白血病細(xì)胞對(duì)阿霉素、柔紅霉素的敏感性（P＜0.05），lapatinib呈濃度依賴性增加羅丹明123在過表達(dá)P-gp的原代白血病細(xì)胞的積累。 結(jié)論：①Lapatinib能明顯增加阿霉素、柔紅霉素對(duì)K562/ADR細(xì)胞的毒性，Lapatinib可以逆轉(zhuǎn)P-糖蛋白介導(dǎo)的MDR。②Lapatinib增強(qiáng)阿霉素、柔紅