豌豆核基質結合區(qū)在轉基因水稻中的功能分析.pdf

1、基因工程手段培育植物新品種獲得了令人矚目的成績，然而要想獲得穩(wěn)定表達的轉基因植株確面臨著很大的因難，在植物轉基因中，轉基因沉默是一個普遍現(xiàn)象，這影響了轉基因農(nóng)作物新品種的培育。因此采取有效的策略防止沉默現(xiàn)象是一項十分有意義的工作。核基質結合區(qū)(matrix attachment region，MAR)是與核基質(或核骨架)特異結合的DNA序列，通過與核基質的結合，它能使染色質形成獨立的環(huán)狀結構，調控基因的轉錄和表達，減少由于位置效應引起

2、的轉基因沉默。 本研究將來源于豌豆的MAR序列用于轉基因水稻研究，將MAR序列分別構建在報導基因(β-葡糖醛酸酶β-glucuronidase，GUS)gus和篩選標記基因(潮霉素磷酸轉移酶，HPT)hpt兩側(-MAR-gus-MAR-hpt、-gus-MAR-hpt-MAR-)，首先通過農(nóng)桿菌葉片注射瞬時表達，與不含MAR序列的轉基因煙草對比表明瞬時表達并不提高作為報導基因gus的表達水平；通過農(nóng)桿菌介導轉化水稻，GUS活

3、性定量測定表明，MAR序列可以提高報告基因的表達水平，相對于MAR序列位于hpt基因表達框兩側，當MAR位于gus基因表達框兩側時GUS活性提高了兩倍，并且能在后代中穩(wěn)定表達，而不含MAR序列的對照轉基因植株在T1代則出現(xiàn)了基因沉默；利用實時定量PCR(real-time quantitative PCR)的方法，合成了針對gus基因與水稻內源單拷貝(蔗糖磷酸合成酶sucrose phosphate synthase，SPS)sps基因