白花丹參水提物對大鼠腦梗死后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的： 研究白花丹參水提物對大鼠腦梗死后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響，并初步探討其機(jī)制。 方法： 雄性清潔級Wister大鼠192只，供體重240g～300g，由山東大學(xué)試驗動物中心提供。首先隨機(jī)選取大鼠120只，分為缺血組和假手術(shù)組，每組又分為3h、6h、12h、24h、48h共5個時間點(diǎn)，每時間點(diǎn)12只大鼠（6只用于TUNEL染色，6只用于流式細(xì)胞術(shù)檢測），均采用改良線栓法制作大鼠局灶性腦缺血模型，并于術(shù)后規(guī)定時間處死

2、。其余72只大鼠分為生理鹽水對照組（n=18），藥物預(yù)防組（n=54），藥物預(yù)防組又分為白花丹參低劑量組（10g／kg體重）、中劑量組（20g／kg體重）、高劑量（40g／kg體重）三個劑量組，藥物預(yù)防組動物于術(shù)前7d用白花丹參水提物灌胃，每天一次，持續(xù)一周，每劑量組18只動物（6只用于TTC染色，6只用于TUNEL染色和免疫組化，6只用于流式細(xì)胞術(shù)檢測），應(yīng)用TTC染色確定各組動物腦梗死體積，應(yīng)用TUNEL染色和流式細(xì)胞術(shù)檢測各組動物

3、腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平，應(yīng)用免疫組化檢測bc1-2、bax、caspa，se-3表達(dá)水平。 結(jié)果： 1．大鼠局灶性腦缺血后腦組織切片經(jīng)TUNEL染色，3h組未見凋亡細(xì)胞，6h組在缺血側(cè)腦組織尤其是半暗帶區(qū)可見凋亡細(xì)胞，12h時凋亡細(xì)胞逐漸增多，24h達(dá)高峰，48h時凋亡水平稍下降。 2．大鼠局灶性腦缺血后24h腦組織標(biāo)本可觀察到白色梗死灶，梗塞灶位于額頂葉皮質(zhì)以及皮質(zhì)下白質(zhì)（為大腦中動脈供血區(qū)），白花丹參低劑量組

4、、中劑量組與生理鹽水組比較梗死體積減小（p<0.05），白花丹參高劑量組與生理鹽水組比較梗死體積明顯減小（p＜0.01）。 3．TUNEL染色示白花丹參低劑量組與生理鹽水組間神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平無顯著差異（p＞0.05），白花丹參中劑量組比生理鹽水組神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平降低（p＜0.05），白花丹參高劑量組比生理鹽水組明顯降低（p＜0.01）。白花丹參低、中、高三劑量組之間比較神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平無明顯差異（p＞0.05）。 4．流

5、式細(xì)胞術(shù)檢測顯示白花丹參低劑量組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率比生理鹽水組減?。╬＜0.05），中、高劑量組神經(jīng)細(xì)胞凋亡率均比生理鹽水組明顯減小（p＜0.01）。白花丹參低、中、高三劑量組之間比較神經(jīng)細(xì)胞凋亡率無明顯差異（p＞0.05）。 5．免疫組化示白花丹參低劑量組bc1-2表達(dá)水平與生理鹽水組無顯著性差異（p＞0.05），白花丹參中、高劑量組bc1-2表達(dá)水平均比生理鹽水組明顯增高（p＜0.05）；白花丹參低劑量組bax表達(dá)水平與生理鹽水

6、組無顯著性差異（p＞0.05），白花丹參中劑量、高劑量組bax表達(dá)水平均比生理鹽水組明顯降低（p＜0.05）；白花丹參低劑量組caspase-3表達(dá)水平與生理鹽水組無顯著性差異（p＞0.05），而白花丹參中劑量、高劑量組caspase-3表達(dá)水平均比生理鹽水組明顯降低（p＜0.05）。 結(jié)論： 預(yù)防性應(yīng)用白花丹參水提物能有效降低腦梗死時的神經(jīng)細(xì)胞凋亡水平，對凋亡線粒體途徑（抑制bax的表達(dá)、刺激bc1-2的表達(dá)和抑制ca