白花丹參對大鼠腦缺血再灌注后神經(jīng)再生的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察白花丹參干預(yù)對大鼠腦缺血損傷側(cè)新生細(xì)胞增殖的影響，探討腦缺血損傷及白花丹參干預(yù)對神經(jīng)再生的影響及其可能機(jī)制，從而為白花丹參治療缺血性腦血管病提供實驗依據(jù)，為白花丹參的開發(fā)利用提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.局灶性腦缺血模型的建立:本實驗采用經(jīng)典的線栓法制備局灶性腦缺血再灌注模型（middlecerebralarteryocclusion，MCAO）。所用實驗動物為雄性成年SD(Sprag

2、ue-Dawley)大鼠，實驗麻醉劑選擇10％的水合氯醛腹腔麻醉，麻醉后將特制的線栓經(jīng)頸總動脈(commoncarotidartery,CCA)插入，沿頸內(nèi)動脈(internalcarotidartery，ICA)走行至至大腦中動脈起始部位及大腦前動脈近心端，從而阻斷大腦中動脈的血流，使其所供應(yīng)的腦區(qū)出現(xiàn)缺血，進(jìn)線深度以CCA分叉開始計算大約為18.0士0.5mm。隨著缺血時間的延長，其血流灌注部位的功能即出現(xiàn)障礙，如大鼠會出現(xiàn)偏癱和偏

3、身感覺障礙。手術(shù)完成后于腦缺血1h緩慢拔出栓線，同時結(jié)扎ECA殘端以防止出血，實驗大鼠于缺血再灌注后的不同時間點分別處死取腦。
　　 2.BrdU摻入方法:BrdU于動物處死取材前三天進(jìn)行腹腔注射，注射劑量為100mg/kg，每天3次，最后一次注射2h后取材。
　　 3.白花丹參制劑制備:白花丹參根洗凈涼干，用蒸餾水浸泡2h，煮沸30min，過濾，藥渣加3～5倍量水，繼續(xù)煎煮，煮沸20min后進(jìn)行過濾，過濾后將濾液合并混

4、合，濾渣加入適量乙醇混合后過夜沉淀并提取上清液，此過程需重復(fù)操作3遍，最后將所有濾液收集混合，混合后放于40℃真空中進(jìn)行蒸發(fā)濃縮，濃縮后加入蒸餾水定容，放于4℃保存?zhèn)溆谩?br>　　 4.免疫組織化學(xué)方法檢測腦內(nèi)BrdU陽性細(xì)胞
　　 雄性SD大鼠，隨機(jī)分為三組:①假手術(shù)組;②單純腦缺血再灌注組;③腦缺血再灌注+白花丹參治療組。腦缺血1h再灌注14d后取材，制各冰凍切片，采用免疫組織化學(xué)標(biāo)記方法檢測BrdU陽性細(xì)胞。
　

5、　 5.水迷宮實驗:雄性SD大鼠，隨機(jī)分為三組:①假手術(shù)組;②單純腦缺血再灌注組;③腦缺血再灌注+白花丹參治療組。對大鼠水迷宮的訓(xùn)練于術(shù)前5d即開始進(jìn)行，所有實驗大鼠于術(shù)前、腦缺血1h再灌注14d分別記錄大鼠的逃避潛伏期(escapelatency,EL)。
　　 結(jié)果：
　　 1.BrdU陽性細(xì)胞表達(dá)
　　 (1)腦缺血損傷側(cè)紋狀體區(qū)新生細(xì)胞表達(dá):與假手術(shù)對照組比較，單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多(P＜0

6、.01)，腦缺血再灌注+白花丹參治療組新生細(xì)胞較單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多(P＜0.01);
　　 (2)腦缺血損傷側(cè)側(cè)腦室區(qū)新生細(xì)胞表達(dá):與假手術(shù)對照組比較，單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多（P＜0.01），腦缺血再灌注+白花丹參治療組新生細(xì)胞較單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多(P＜0.01);
　　 (3)腦缺血損傷側(cè)海馬區(qū)新生細(xì)胞表達(dá):與假手術(shù)對照組比較，單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多(P＜0.01

7、)，腦缺血再灌注+白花丹參治療組新生細(xì)胞較單純腦缺血再灌注組新生細(xì)胞明顯增多(P＜0.01);
　　 2.水迷宮實驗:與假手術(shù)對照組比較，單純腦缺血再灌注組EL明顯延長(P＜0.01);腦缺血再灌注+白花丹參治療組EL較單純腦缺血再灌注組EL明顯縮短(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.急性缺血性腦損傷可誘導(dǎo)大鼠損傷側(cè)腦區(qū)新生細(xì)胞大量增殖。
　　 2.白花丹參干預(yù)可誘導(dǎo)腦內(nèi)新生細(xì)胞增殖，新生增殖細(xì)胞