激活肝枯否細(xì)胞聯(lián)合血管生成抑制劑抑制大腸癌肝轉(zhuǎn)移的研究.pdf

1、本文對(duì)激活肝枯否細(xì)胞聯(lián)合血管生成抑制劑抑制大腸癌肝轉(zhuǎn)移進(jìn)行了研究，文章主要分為以下幾部分： 第1章脂多糖激活肝枯否細(xì)胞抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究 目的：肝臟枯否細(xì)胞(Kupffer cells，KCs)是機(jī)體巨噬細(xì)胞中最大的群體，具有重要的免疫功能。本研究旨在探討脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)是否能激活肝臟枯否細(xì)胞的抗腫瘤活性。 方法：酶消化法分離提取小鼠KCs，KCs與腫瘤細(xì)胞CT26混合培養(yǎng)

2、，用WST-8法測(cè)定不同效靶比時(shí)KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制情況，然后在同一效靶比(KCs:CT26=10:1)測(cè)定LPS不同濃度時(shí)KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制情況。硝酸還原酶法測(cè)定不同濃度LPS刺激后KCs上清液NO濃度。小鼠腹腔注射LPS，分離KCs，測(cè)定KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制情況(KCs：CT26=10：1)。 結(jié)果：隨著KCs：CT26效靶比的增大，KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制率逐漸增高，效靶比為1:1、2

3、:1、5;1、10:1、20:1、50:1和100:1時(shí)，KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制率分別為7.86﹪、13.37﹪、15.51﹪、18.86﹪、18.79﹪、19.24﹪和19.98﹪。加入LPS后其抑制率明顯增加，LPS濃度為0.001 μg/ml、0.01 μg/ml、0.1 μg/ml、1 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml和1000 μg/ml時(shí)抑制率分別為16.86﹪、21.10﹪、25.64﹪、28.38

4、﹪、26.78﹪、33.38﹪和38.70﹪。隨著LPS濃度的增高，KCs上清液NO濃度逐漸增高，LPS濃度為0.001 μg/ml、0.01 μg/ml、0.1 μg/ml、1 μg/ml、10 μg/ml、100 μg/ml和1000 μg/ml時(shí)，KCs上清液NO濃度分別為136.36μmol/l、151.29μmol/l、150.56μmol/l、155.56μmol/l、166.79μmol/l、172.73μmol/l和17

5、3.29μmol/l。腹腔注射LPS后，KCs對(duì)CT26細(xì)胞增殖的抑制率為20.54﹪，高于對(duì)照組18.37﹪，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論：脂多糖體外、體內(nèi)均能激活肝臟枯否細(xì)胞，從而增強(qiáng)其抗腫瘤活性；激活的枯否細(xì)胞分泌NO明顯增加，提示可能是脂多糖增強(qiáng)枯否細(xì)胞抗腫瘤活性的機(jī)制之一。 第2章激活肝枯否細(xì)胞聯(lián)合血管生成抑制劑抑制大腸癌肝轉(zhuǎn)移 目的：建立實(shí)驗(yàn)性大腸癌肝轉(zhuǎn)移模型，探討脂多糖激活肝枯否細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用血管生

6、成抑制劑YH-16對(duì)大腸癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用。 方法：60只小鼠脾臟包膜下接種小鼠結(jié)腸腺癌細(xì)胞CT26懸液0.1ml，含腫瘤細(xì)胞1 ×10<'6>個(gè)，建立實(shí)驗(yàn)性大腸癌肝轉(zhuǎn)移模型。小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、脂多糖組、YH-16組、聯(lián)合治療組(脂多糖+YH-16)。給藥方法：脂多糖劑量為0.2mg/kg，YH-16劑量為1.5mg/kg，所有小鼠接種腫瘤細(xì)胞后1天腹腔內(nèi)注射藥物，隔天一次，對(duì)照組以生理鹽水代替藥物。接種腫瘤細(xì)胞后2周處死小鼠

7、，觀察各組小鼠肝轉(zhuǎn)移灶數(shù)目、脾臟腫瘤大小。取肝轉(zhuǎn)移瘤行病理檢查，采用免疫組化方法檢測(cè)肝轉(zhuǎn)移瘤血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)和腫瘤微血管密度(MVD)。 結(jié)果：對(duì)照組、脂多糖組、YH-16組和聯(lián)合治療組肝轉(zhuǎn)移率分別為100﹪、86.7﹪、80.0﹪、和60.0﹪，與對(duì)照組比較，聯(lián)合治療組肝轉(zhuǎn)移率明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，脂多糖組、YH-16組肝轉(zhuǎn)移率下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。進(jìn)一步比較各組肝轉(zhuǎn)

8、移瘤數(shù)目，脂多糖組、YH-16組、聯(lián)合治療組肝轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目明顯低于對(duì)照組(P值分別為0.015、0.013和<0.001)，聯(lián)合治療組肝轉(zhuǎn)移瘤數(shù)目低于脂多糖組(P=0.013)和YH-16組(P=0.032)，而脂多糖組和YH-16組兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.860)。各組肝轉(zhuǎn)移瘤組織中VEGF表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組比較，YH-16組和聯(lián)合治療組肝轉(zhuǎn)移瘤組織中MVD計(jì)數(shù)明顯降低(P值均<0.05)。各組脾臟腫瘤體積比較差異無(wú)