甲氧雌二醇抑制大腸癌肝轉(zhuǎn)移的實驗研究.pdf

1、第一部分大腸癌肝轉(zhuǎn)移模型建立的方法學(xué)改進 目的：建立模擬臨床大腸癌根治術(shù)后肝轉(zhuǎn)移動物模型，并探討模型建立方法的改進。方法：在裸鼠脾臟內(nèi)注入人結(jié)腸癌細(xì)胞5min后切除脾臟。術(shù)后分別于20、35、60天對裸鼠行病理檢查。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)肝轉(zhuǎn)移率為90％，肝外其它臟器未見轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，組織學(xué)上證實肝轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)為低分化腺癌。結(jié)論：本實驗方法建立的模型能很好地模擬臨床大腸癌根治術(shù)后肝轉(zhuǎn)移征象，同時在麻醉藥物及濃度選擇、裸鼠的固定、手術(shù)切口部位及長度、

2、細(xì)胞懸液注射的部位及速度、脾臟切除的注意事項和術(shù)后的觀察等方面做了改進。方法的改進提高了模型荷瘤的成功率和器官靶向性。 第二部分甲氧雌二醇對大腸癌肝轉(zhuǎn)移的抑瘤作用 目的：實驗研究血管生成抑制劑甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol2-ME)對大腸癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用。方法：采用人大腸低分化腺癌細(xì)胞株LS174T注射入裸鼠脾臟，后將脾臟切除建立類似于臨床的大腸癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型。建模后第3周開始分組治療，分別腹腔注射

3、PBS100mg／kg(對照組)、2-ME50mg／kg、2-ME100mg／kg、2-ME150mg／kg、5-FU50mg／kg(治療組)。第7周處死動物，測量肝臟轉(zhuǎn)移腫瘤瘤重、腫瘤微血管密度(microvesseldensity，MVD)、抑瘤率、腫瘤細(xì)胞的凋亡指數(shù)(apoptoticindex，AI)。結(jié)果：肝臟轉(zhuǎn)移腫瘤瘤重依次為：(1．41±0．39)g、(1．03±0．27)g、(0．79±0．12)g、(0．54±0．21

4、)g、(0．67±0．14)g；MVD依次為：(13．8±5．2)、(9．1±2．7)、(3．3±1．3)、(0．85±0．6)、(8．4±3．4)；抑瘤率依次為：0％、26．95％、43．97％、61．70％、52．48％：AI依次為：(3．6±2．4)％、(5．4±1．7)％、(9．1±3．1)％、(12．8±3．9)％、(9．5+2．3)％。治療組與對照組相比，組間大腸癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用有顯著性差異，且抑制作用與2-ME是劑量正相

5、關(guān)。結(jié)論：血管生成抑制劑2-ME通過抗腫瘤血管生成，促進大腸癌細(xì)胞凋亡，對體內(nèi)大腸癌肝轉(zhuǎn)移具有較強的抑制作用。 第三部分甲氧雌二醇對大腸癌肝轉(zhuǎn)移的放射增敏效應(yīng) 目的：實驗研究血管生成抑制劑甲氧雌二醇(2-methoxyestradiol2-ME)對大腸癌肝轉(zhuǎn)移的放射增敏效應(yīng)。方法：采用人大腸低分化腺癌細(xì)胞株LS174T注射入裸鼠的脾臟，再將脾臟切除建立模擬臨床的大腸癌肝轉(zhuǎn)移裸鼠模型。建模后第3周開始分組治療，分為2-ME

6、(150mg／kg)組、2-ME150mg／kg+放療聯(lián)合組、單純放療組。第7周處死動物，測量肝臟轉(zhuǎn)移腫瘤瘤重、腫瘤微血管密度(microvesseldensity，MVD)、抑瘤率、腫瘤細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptoticindex，AI)。再將大腸癌細(xì)胞在加入2-ME的培養(yǎng)液孵化培養(yǎng)，同時采用流式細(xì)胞儀(FCM)觀察細(xì)胞的凋亡率及細(xì)胞周期變化。結(jié)果：肝臟轉(zhuǎn)移腫瘤瘤重依次為：(0．54±0．21)g、(0．18±0．12)g、(0．73±

7、0．17)g；MVD依次為：(0．85±0．6)、(0．81±0．2)、(11．3±1．6)；抑瘤率依次為：61．70％、87．23％、48．23％；AI依次為：(12．8±3．9)％、(16．7±4．5)％、(7.1±5．7)％。各治療組組間大腸癌肝轉(zhuǎn)移的抑制作用有顯著性差異。2-ME作用細(xì)胞后G2／M期細(xì)胞減少，G0／G1期細(xì)胞增加，同時出現(xiàn)細(xì)胞凋亡率的升高。結(jié)論：血管生成抑制劑2-ME通過抑制腫瘤血管生成，誘導(dǎo)大腸癌細(xì)胞的調(diào)亡，促