Cortactin與大腸癌肝轉移相關性研究.pdf

1、第一部分大腸癌肝轉移細胞增殖能力減弱
　　 目的：通過階梯轉移法在裸鼠中篩選出人結腸癌肝轉移細胞，然后對結腸癌肝轉移細胞的生長增殖能力進行鑒定。
　　 方法：通過SW1116細胞株裸鼠皮下連續(xù)5次傳代后取皮下種植瘤裸鼠結腸原位種植，分別取肝臟轉移灶和皮下5代細胞進行原代培養(yǎng)，獲得大腸癌肝轉移細胞和皮下5代的原代細胞，分別命名為CHM-1（結直腸癌肝轉移細胞1代）和P5（皮下第5代），通過cck-8測生長曲線、流式檢測細胞

2、周期以及細胞周期相關的蛋白的免疫細胞化學來對SW1116、CHM-1和P5增殖能力進行檢測。
　　 結果：細胞增殖實驗發(fā)現(xiàn)CHM-1生長速度明顯慢于SW1116和P5細胞（P<0.05）；流式細胞周期分析中CHM-1 細胞G1 期（ 68.39±2.865 ） ％ 比例高于SW1116(50.44±1.472)％ 和P5 （ 53.93±2.651 ） ％ （ P<0.05 ）， G2 期CHM-19(13.53±4.411)％

3、 比例要低于SW1116 （ 32.03±5.645 ） ％ 和P5（29.72±3.559）％（P<0.05）,S期三種細胞差異無統(tǒng)計學意義（18.25±6.901）％、（19.05±4.162）％、（18.93±0.169）％（P>0.05）；免疫細胞化學分析發(fā)現(xiàn)細胞周期蛋白Cyclin D1在CHM-1(23.7±4.7)％中的表達比SW1116(30.2±5.1)％和P5(32.1±4.2)％減少（P<0.05）；
　　

4、 結論：發(fā)現(xiàn)侵襲能力和生長增殖能力具有反向關聯(lián)，即結腸癌肝轉移細胞具有更強的侵襲能力，但生長增殖速度比其他細胞更慢。
　　 第二部分Cortactin與大腸癌肝轉移的相關性研究
　　 目的：證實cortactin的不同表達與大腸癌肝轉移相關方法：通過構建cortactin的SiRNA和過表達慢病毒載體并轉染SW1116細胞，通過western-blot檢測轉然后細胞株中cortactin的表達，通過侵襲和遷移試驗檢測不同

5、cortactin表達量的細胞株之間的運動侵襲能力的差異，將具有不同cortactin表達量的SW1116細胞株首先在裸鼠皮下成瘤，然后原位種植于隨機分組的6W大小的裸鼠回盲部，觀察不同的cortactin表達量的裸鼠肝轉移率的差異。
　　 結果：成功構建了不同cortactin表達的大腸癌細胞株，通過western-blot和侵襲遷移試驗發(fā)現(xiàn)cortactin的表達量與大腸癌細胞侵襲能力正相關（P<0.05），通過動物實驗發(fā)現(xiàn)