Cortactin與大腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)性研究.pdf

1、第一部分大腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞增殖能力減弱
　　 目的：通過階梯轉(zhuǎn)移法在裸鼠中篩選出人結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞，然后對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞的生長增殖能力進(jìn)行鑒定。
　　 方法：通過SW1116細(xì)胞株裸鼠皮下連續(xù)5次傳代后取皮下種植瘤裸鼠結(jié)腸原位種植，分別取肝臟轉(zhuǎn)移灶和皮下5代細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，獲得大腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞和皮下5代的原代細(xì)胞，分別命名為CHM-1（結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞1代）和P5（皮下第5代），通過cck-8測生長曲線、流式檢測細(xì)胞

2、周期以及細(xì)胞周期相關(guān)的蛋白的免疫細(xì)胞化學(xué)來對SW1116、CHM-1和P5增殖能力進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果：細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)CHM-1生長速度明顯慢于SW1116和P5細(xì)胞（P<0.05）；流式細(xì)胞周期分析中CHM-1 細(xì)胞G1 期（ 68.39±2.865 ） ％ 比例高于SW1116(50.44±1.472)％ 和P5 （ 53.93±2.651 ） ％ （ P<0.05 ）， G2 期CHM-19(13.53±4.411)％

3、 比例要低于SW1116 （ 32.03±5.645 ） ％ 和P5（29.72±3.559）％（P<0.05）,S期三種細(xì)胞差異無統(tǒng)計學(xué)意義（18.25±6.901）％、（19.05±4.162）％、（18.93±0.169）％（P>0.05）；免疫細(xì)胞化學(xué)分析發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期蛋白Cyclin D1在CHM-1(23.7±4.7)％中的表達(dá)比SW1116(30.2±5.1)％和P5(32.1±4.2)％減少（P<0.05）；
　　

4、 結(jié)論：發(fā)現(xiàn)侵襲能力和生長增殖能力具有反向關(guān)聯(lián)，即結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲能力，但生長增殖速度比其他細(xì)胞更慢。
　　 第二部分Cortactin與大腸癌肝轉(zhuǎn)移的相關(guān)性研究
　　 目的：證實(shí)cortactin的不同表達(dá)與大腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)方法：通過構(gòu)建cortactin的SiRNA和過表達(dá)慢病毒載體并轉(zhuǎn)染SW1116細(xì)胞，通過western-blot檢測轉(zhuǎn)然后細(xì)胞株中cortactin的表達(dá)，通過侵襲和遷移試驗(yàn)檢測不同

5、cortactin表達(dá)量的細(xì)胞株之間的運(yùn)動侵襲能力的差異，將具有不同cortactin表達(dá)量的SW1116細(xì)胞株首先在裸鼠皮下成瘤，然后原位種植于隨機(jī)分組的6W大小的裸鼠回盲部，觀察不同的cortactin表達(dá)量的裸鼠肝轉(zhuǎn)移率的差異。
　　 結(jié)果：成功構(gòu)建了不同cortactin表達(dá)的大腸癌細(xì)胞株，通過western-blot和侵襲遷移試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)cortactin的表達(dá)量與大腸癌細(xì)胞侵襲能力正相關(guān)（P<0.05），通過動物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)