小鼠腮弓胚層分離的方法學(xué)比較研究.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)旨在對(duì)分離小鼠腮弓外、中胚層的三種方法進(jìn)行研究和比較,找出針對(duì)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?其最合適的分離方法及其過(guò)程,并且對(duì)分離的效果進(jìn)行組織學(xué)特殊染色和SEM觀測(cè)以驗(yàn)證其效果.該實(shí)驗(yàn)以9-30體節(jié)時(shí)期的小鼠腮弓為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,采用三種方法:方法一為10mM的EDTA(約相當(dāng)于含0.37224﹪的乙二胺四乙酸二鈉)的PBS溶液調(diào)定pH值為7.0,孵育分離腮弓;方法二為0.25﹪胰蛋白酶的D-hank's溶液調(diào)定pH值為7.0,孵育分離腮弓;方法三

2、為0.125﹪胰蛋白酶和0.005﹪的乙二胺四乙酸二鈉(約相當(dāng)于含0.13mM的EDTA)的D-hank's溶液調(diào)定pH值為7.0,孵育分離腮弓.分別在室溫20℃,設(shè)定5~7,7~9,9~11,11~13,13~15,15~17,17~19分鐘共七個(gè)時(shí)間段,每個(gè)時(shí)間段使用三種方法各分離一個(gè)胚胎.確定分離的最早最佳時(shí)間及分離的操作細(xì)節(jié)和操作方法.之后,在所獲得的最佳分離時(shí)間上,獲得分離的上皮與上皮下組織,并采用組織病理學(xué)切片(HE染色+P

3、AS特殊染色)及掃描電子顯微鏡的雙重方法觀測(cè)分離效果.第一種分離液,在8-10分鐘20℃的孵育下,成功的將上皮從基底膜上分離下來(lái).方法一可以用于為了獲取9-30體節(jié)時(shí)期的小鼠第一腮弓或上下頜突不含外胚間充質(zhì)組織或細(xì)胞的外胚上皮.第二種分離液,在13-15分鐘20℃的孵育下,可以將上皮帶基底膜和基底膜下少量的外培間充質(zhì)一同分離下來(lái).分離的層次在外胚間充質(zhì)內(nèi),但是接近基底膜.由于操作相對(duì)困難,方法二不推薦使用.第三種分離液,在5-7分鐘20