龍須菜體表附生細(xì)菌的幾種分離方法比較

1、2007年34(1)微生物學(xué)通報(bào)龍須菜體表附生細(xì)菌的幾種分離方法比較徐永健樂(lè)觀宗張友平(寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院寧波31521)摘要：采用超聲波粉碎法、渦旋振蕩法、超聲波清洗法、研磨勻漿法等4種不同的方法處理龍須菜，分離其體表的附生細(xì)菌，并對(duì)分離細(xì)菌的數(shù)量、種類(lèi)、形態(tài)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞壁特性等進(jìn)行了觀察和分析。通過(guò)對(duì)不同方法和相同方法的不同處理所得結(jié)果比較顯示，超聲波清洗法和研磨勻漿法對(duì)分離細(xì)菌的數(shù)量和種類(lèi)效果都較差；超聲波粉碎法和渦旋振

2、蕩法效果較好，尤以超聲波粉碎法的30W30s處理效果最好，該方法分離到本項(xiàng)目4個(gè)方法13個(gè)處理獲得的16個(gè)菌株中的12個(gè)菌株，龍須菜的細(xì)菌數(shù)17510。cells／g。關(guān)鍵詞：海藻，龍須菜，附生細(xì)菌，分離方法中圖分類(lèi)號(hào)：Q93文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：02532654(2007)01012304ComparisonwithSeveralMethodstoIsolateEpiphyticBacteriafromGracilarialeman

3、eiformis(Rhodophyta)’XUYongJianLEGuan—zongZHANGYou—PIng(FacultyofI_ifeScienceandBiotechnology，Ⅳi6oUniversity，Ningbo315211)Abstract：Weused4methodssuchasultrasoniccrush(UC)，ultrasonicrinse(UR)，whorl8urge(WS)andrubbing(RU)，

4、toisolateepiphyticbacteriafromredalgaGrac／／ar／atemanaiform／sThen，wecountedbacterianumbers，detectedbacterialspecies，observedbacterialconfigurationandcharacteristicofcellwal1Comparedwiththesemethodsandwithdiferenttreatment

5、sinonemethod，theresultsweredrawn：theURandRUwereinferiorinallmethodstoisolatebacterialnumbersandspecies，theUCandWSwerebetter，especiany，thetreatment30W30sofUCWaSthebestinexperimentwhichisolated12of16bacterialspecies，andgot

6、17510cellspergramwetweight&temane／form／sKeywords：SeaweedGrac／／ar／atemanefor~，Epiphyticbacmria，Isolationmethod藻類(lèi)在生長(zhǎng)過(guò)程中向環(huán)境釋放大量的有機(jī)物質(zhì)，使藻細(xì)胞周?chē)纬梢粋€(gè)獨(dú)特的微環(huán)境，稱(chēng)為藻際微環(huán)境(Phycosphere)。在藻際微環(huán)境中，生活著大量的細(xì)菌，這些細(xì)菌具有獨(dú)特的結(jié)構(gòu)與功能，同藻細(xì)胞之間構(gòu)成復(fù)雜的關(guān)系。如對(duì)藻體的附

7、著和變態(tài)產(chǎn)生影響【】J，調(diào)控藻體分泌的物質(zhì)【2；已發(fā)現(xiàn)的許多海洋活性物質(zhì)是由海藻附生菌產(chǎn)生的，如抗生素、酶、色素等4J，藻際微環(huán)境中的微生物是一個(gè)潛在豐富的資源庫(kù)J。盡管已分離和鑒定了許多藻類(lèi)的附生菌，揭示了兩者之間一定的關(guān)系。但對(duì)藻際細(xì)菌的很多生態(tài)學(xué)意義仍然還沒(méi)有研究清楚，在大多數(shù)情況下甚至連起作用菌株都沒(méi)有分離到【6J。要研究這些附生細(xì)’寧波市博士基金項(xiàng)目(No2005A610025)寧波市科技項(xiàng)目(No2004610028)寧波市

8、自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No2006A610087)通訊作者Tel：8657487600374Email：xuyongjian@nbueducn收稿日期：20060310。修回日期：20060510菌的相關(guān)性質(zhì)和作用以及細(xì)菌與海藻之間的復(fù)雜關(guān)系，首先要找到一種能夠有效的從海藻表面分離附生微生物的方法。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于藻類(lèi)表面附生細(xì)菌的分離方法的報(bào)道還很少，在實(shí)驗(yàn)中涉及到附生微生物分離的儀器和方法也不盡一致。本實(shí)驗(yàn)采用4種不同的儀器，設(shè)置了系列分離

9、方法對(duì)龍須菜(Grac／／ar／a／emane／form／s)體表附生細(xì)菌進(jìn)行了分離和鑒定，試圖尋找出一種有效的分離方法，為以后類(lèi)似研究提供一些參考和依據(jù)。1材料與方法11試驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)用龍須菜(G／emane／form／s)采自寧波象維普資訊2007年34(1)微生物學(xué)通報(bào)高于此處理時(shí)間所得的結(jié)果都不好；相似的渦旋振蕩儀的w組也是如此，作用時(shí)間6min以上效果才比較好，經(jīng)比較分析6min和10min處理所得的結(jié)果差異不顯著(P005)；

10、使用超聲波粉碎儀的s組，圖中顯示，不管其作用功率為30W或50W，所分離到的菌落數(shù)都隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)而減少，其中低功率處理要好于高功率處理，分離到最多菌落數(shù)的處理是s1，為17510。cells／g，也是在所有l(wèi)3種處理中所得菌落數(shù)最多的。2O18SlS2S3s4S5S6W1W2W3C1C2C3Y分離方法圖l不同處理所得菌落數(shù)量比較12522各處理分離菌株數(shù)量比較根據(jù)各純化平板上菌株的菌落形狀特征(見(jiàn)表2)，各處理所分離到的菌株種類(lèi)數(shù)

11、量，如表3。其中用超聲波粉碎法，處理龍須菜所獲得的菌落種類(lèi)數(shù)量相對(duì)要比其他幾種方法所得的種類(lèi)數(shù)要多些，尤以s1處理(30W30s)效果最好，初步分離到l2株附生細(xì)菌；渦旋振蕩法也獲得了較多的菌落種類(lèi)，且隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，獲得的菌落數(shù)也在增多，但本試驗(yàn)中6min處理和10min處理盡管在所得菌落種類(lèi)數(shù)量上有一些差異，不過(guò)兩處理間在所得的單位藻體細(xì)菌細(xì)胞密度上沒(méi)有顯著的差異(P005)；采用超聲波清洗法進(jìn)行海藻附生菌的處理，以6min處理