奧地利黑松組織培養(yǎng)研究.pdf

1、本研究以從德國購買的奧地利黑松優(yōu)良種源成熟合子胚為起始外植體，通過器官發(fā)生途徑研究了奧地利黑松在組織培養(yǎng)條件下，不定芽的誘導(dǎo)、分化、伸長、生根及再生植株移栽技術(shù)。 結(jié)果表明，奧地利黑松種子在4℃低溫下預(yù)處理15d，自來水過夜浸泡，使其膨脹后，用0.1％高錳酸鉀溶液消毒30min，無菌水沖洗干凈后剝掉種皮，再用70％酒精漂洗45s，0.1％升汞消毒8min，無菌水沖洗干凈后，剝?nèi)『献优呓臃N到培養(yǎng)基上，污染率和褐化率較低。并且成熟合

2、子胚水平放置在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上時，不定芽誘導(dǎo)率高，不定芽原基形成一般發(fā)生在萌發(fā)的子葉或靠近子葉的上胚軸處。 奧地利黑松器官發(fā)生研究中，不定芽誘導(dǎo)分化的最優(yōu)培養(yǎng)基為3/4WPM+6-BA2.0mg.L-1+蔗糖30g.L-1，一個月后可分化出大量不定芽，誘導(dǎo)率大于55％；最優(yōu)增殖培養(yǎng)基為GD+6-BA0.8mg.L-1+NAA0.01mg.L-1+白糖50g.L-1，增殖率達(dá)900％；之后繼代于MS+NAA0.02mg.L-1+AC1

3、.0g.L-1的培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽伸長生長，GA3抑制叢生芽的伸長。 本研究還以奧地利黑松種子在無菌培養(yǎng)基和營養(yǎng)土中培養(yǎng)的實(shí)生苗帶子葉頂芽為外植體誘導(dǎo)叢生芽。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，營養(yǎng)土中培養(yǎng)的實(shí)生苗帶子葉頂芽在叢生芽誘導(dǎo)過程中，由于污染率較高，而大大影響試驗(yàn)結(jié)果。無菌實(shí)生苗帶子葉頂芽叢生芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為1/2GD+6-BA3.0mg.L-1+NAA0.05mg.L-1+IBA0.2mg.L-1+蔗糖20g.L-1，增殖系數(shù)達(dá)6.23，

4、且以生長20-30d苗齡的實(shí)生苗為最優(yōu)外植體。 本論文最后研究了奧地利黑松不定芽的生根及再生植株移栽技術(shù)。研究表明，奧地利黑松不定芽試管內(nèi)生根明顯優(yōu)于試管外生根。試管內(nèi)生根的的適宜培養(yǎng)基為WPM+NAA0.02mg.L-1+IBA0.5mg.L-1+蔗糖2.0％，生根率最高可達(dá)55％。6-BA和活性炭的加入不利于不定芽試管內(nèi)生根。兩種生長素混合使用效果比單獨(dú)使用一種生長素的效果要好。奧地利黑松再生植株移栽過程中，受到多種因素的影