GC-MSCs和胃癌組織共差異miRNAs檢測的臨床意義及功能研究.pdf

1、目的：篩選胃癌間質(zhì)干樣細(xì)胞(gastric cancer tissues-derived mesenchymal stem cell-like cells,GC-MSCs)和胃癌組織中差異表達(dá)的miRNAs,即GG-miRNAs。探討GG-miRNAs在胃癌組織中表達(dá)的臨床意義及其臨床病理診斷應(yīng)用的價(jià)值。明確GC-MSCs對胃癌細(xì)胞的調(diào)控功能,初步探討GG-miRNAs介導(dǎo)GC-MSCs對胃癌細(xì)胞的作用。
　　 方法：采用組織塊

2、貼壁法從配對的胃癌與相應(yīng)的癌旁組織中分離培養(yǎng)GC-MSCs和癌旁間質(zhì)干細(xì)胞(gastric cancer adjacent non-cancerous tissue-derived MSCs,GCN-MSCs)。采用Exiqon miRCURYTM LNA microRNA芯片篩選GC-MSCs與GCN-MSCs、匹配的癌組織與癌旁組織差異表達(dá)的miRNA,通過芯片檢測結(jié)果分析及定量RT-PCR驗(yàn)證確定GG-miRNAs。定量RT-PC

3、R檢測52例胃癌及相應(yīng)癌旁組織中GG-miRNAs的表達(dá)水平,結(jié)合臨床病理資料分析GG-miRNAs與臨床病理特征的相關(guān)性。體外通過軟瓊脂克隆形成及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測GC-MSCs對胃癌細(xì)胞HGC-27生長和轉(zhuǎn)移的作用。定量RT-PCR檢測作用后HGC-27中GG-miRNAs變化。體內(nèi)共注射GC-MSCs和HGC-27,建立BALB/c裸鼠皮下致瘤模型,通過測定瘤體大小和繪制瘤體生長曲線分析GC-MSCs對胃癌細(xì)胞生長的作

4、用。定量RT-PCR檢測瘤組織中GG-miRNAs的表達(dá)變化。采用miRNA inhibitor轉(zhuǎn)染GC-MSCs和HGC-27,抑制相應(yīng)細(xì)胞內(nèi)GG-miRNAs的表達(dá)。采用軟瓊脂克隆形成及Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后GC-MSCs對HGC-27細(xì)胞生長及遷移的作用。定量RT-PCR檢測GC-MSC上清(GC-MSC conditioned medium,GC-MSC-CM)作用轉(zhuǎn)染后HGC-27中GG-miRNAs的表達(dá)。

5、r>　　 結(jié)果：分離純化獲得7對GC-MSCs和GCN-MSCs。芯片篩選檢測發(fā)現(xiàn)胃癌組織上調(diào)miRNAs有253個(gè),下調(diào)miRNAs有243個(gè),GC-MSC上調(diào)miRNAs有177個(gè),下調(diào)miRNAs有160個(gè)。兩組差異miRNAs表達(dá)譜有部分重疊,重疊上調(diào)的miRNAs有25個(gè),下調(diào)的有11個(gè)。選取其中共上調(diào)顯著的5個(gè)miRNAs(miR-125b、miR-199a-5p、miR-214、miR-221和miR-222)進(jìn)行驗(yàn)證,

6、發(fā)現(xiàn)miR-214,miR-221和miR-222均在GC-MSC和胃癌組織中高表達(dá),被命名為GG-miRNAs。GG-miRNAs在胃癌組織中的表達(dá)均高于相應(yīng)癌旁組織。miR-214的表達(dá)與胃癌的侵襲深度,漿膜侵襲及分級相關(guān)。miR-221與胃癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和分級相關(guān)。miR-222與胃癌的侵襲深度,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分級相關(guān)。體外GC-MSCs促進(jìn)胃癌細(xì)胞HGC-27的克隆形成和遷移,體內(nèi)GC-MSCHGC-27共注射組瘤體體積最大且生長

7、速度最快。GC-MSC作用后胃癌細(xì)胞和瘤體組織中miR-221的表達(dá)上調(diào)顯著。靶向抑制GC-MSCs中miR-221的表達(dá)可以抑制對HGC-27的克隆形成和遷移的促進(jìn)作用。GC-MSC-CM作用低表達(dá)miR-221HOC-27后可以增加其miR-221的表達(dá)。
　　 結(jié)論：GC-MSCs和胃癌組織存在著共差異表達(dá)的GG-miRNAs,GG-miRNAs在胃癌組織中高表達(dá)與臨床病理特征密切相關(guān),可能成為新的胃癌臨床病理診斷分子標(biāo)志