SHIP2對胃癌細胞生長和凋亡的影響以及增強胃癌細胞對紫杉醇敏感性的研究.pdf

1、研究背景及目的：胃癌是最常見的惡性腫瘤之一,在世界范圍內(nèi)的發(fā)病率僅次于肺癌,位居第二位;而在我國位居所有惡性腫瘤死亡率第一位。因此,深入了解有關(guān)胃癌發(fā)生和發(fā)展過程中腫瘤細胞的多種分子失衡機制,以尋求胃癌靶向治療的特異性分子靶點對胃癌的治療具有重要意義。目前已有研究表明,PI3K/Akt信號通路在胃癌細胞中被高度激活,這可能導(dǎo)致了胃癌對化療的抵抗。PTEN表達的降低或缺失正是導(dǎo)致PI3K/Akt信號通路在腫瘤細胞中活化的重要機理。然而對于

2、與PTEN類似的多磷酸肌醇-5-磷酸酶在胃癌發(fā)生和發(fā)展中的作用尚無相關(guān)研究報道?？刮⒐芑熕幬镒仙即甲鳛橐环N化療藥物應(yīng)用于胃癌的治療,其主要殺傷機制在于能夠誘導(dǎo)胃癌細胞凋亡。Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)是BH3-only(Bcl-2 homology3(BH3)-only)蛋白家族中促凋亡成員之一,被報道在多種腫瘤細胞凋亡過程中發(fā)揮了重要作用。目前研究認為抗微管化療藥物作用于

3、腫瘤細胞可通過上調(diào)Bim活性,誘導(dǎo)細胞凋亡。本研究旨在探討多磷酸肌醇-5-磷酸酶分子-SHIP2對胃癌細胞生長和凋亡的影響,以及是否增強胃癌細胞對紫杉醇的敏感性及其分子機制,為胃癌的治療提供一個新的分子靶點。
　　方法：采用Western blot檢測胃癌細胞中SHIP2、PTEN和磷酸化Akt的表達水平,實時定量PCR檢測SHIP2 mRNA的水平。選擇兩株低表達SHIP2的胃癌細胞株SGC-7901和MGC-803瞬時轉(zhuǎn)染SH

4、IP2 cDNA,用Western blot檢測SHIP2和磷酸化Akt的表達,MTT檢測細胞的生存率,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。對過表達SHIP2的SGC-7901細胞同時轉(zhuǎn)染myr-Akt,檢測其對SHIP2促進胃癌細胞凋亡作用的逆轉(zhuǎn)效果。選擇對紫杉醇低敏感的BGC-823細胞,瞬時轉(zhuǎn)染SHIP2 cDNA,用Western blot檢測SHIP2、磷酸化Akt和Bim的表達,紫杉醇作用48 h后,收集細胞,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況

5、。將GV112-Puromycin空載體和GV112-Puromycin-Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death)慢病毒顆粒分別感染BGC-823細胞,建立穩(wěn)定細胞株,再將pCMV6-SHIP2質(zhì)粒轉(zhuǎn)染該穩(wěn)定細胞株,流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：與正常胃粘膜上皮細胞相比,在胃癌細胞中SHIP2蛋白和mRNA的表達水平是明顯降低的;在胃癌細胞中過表達SHIP2能降低pAkt

6、的表達水平,伴隨Akt下游分子Bim和p27的上調(diào);過表達SHIP2抑制胃癌細胞的生長,促進胃癌細胞的凋亡,而共轉(zhuǎn)染myr-Akt能逆轉(zhuǎn)SHIP2對胃癌細胞促凋亡的作用。在對紫杉醇低敏感的BGC-823細胞中轉(zhuǎn)染SHIP2基因,紫杉醇作用48 h后,細胞凋亡率明顯上升,同時伴隨Bim表達的上調(diào);在BGC-823細胞中“knockdown”Bim基因后,再轉(zhuǎn)染SHIP2 cDNA,紫杉醇作用48 h后,細胞凋亡率明顯降低。
　　結(jié)論