大豆反義fad2-1基因轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌和遺傳多樣性RAPD分析.pdf

1、本研究旨在：Ⅰ.克隆大豆油酸脫飽和酶基因fad2-1及其片段，構(gòu)建其反義基因表達載體，轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌LBA4404，獲得工程菌，為通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法培育大豆新品種提供理論和技術(shù)依據(jù)，而且為進一步探討反義RNA的全長序列或是片段可以有效的發(fā)揮抑制作用提供一定的實驗基礎(chǔ)。Ⅱ.建立河南部分栽培大豆遺傳多樣性的RAPD分子標(biāo)記體系，為其育種和品種鑒定提供了理論和技術(shù)依據(jù)。研究取得的主要結(jié)果如下： (1)根據(jù)NCBI報道的大豆fad2-1

2、基因序列，設(shè)計出兩對有效的引物，用PCR方法從大豆基因組DNA中分離克隆了fad2-1基因1196bp的全長序列和656bp的片段； (2)將fad2-1基因的全長序列和片段用SalⅠ和BamHⅠ雙酶切后反向插入經(jīng)SalⅠ和BamHⅠ雙酶切的pBt植物表達載體中，構(gòu)建了含有反義基因的植物表達載體； (3)采用凍融法將含有反義fad2-1基因的全長序列和片段的植物表達載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌LBA4404，經(jīng)過抗性篩選、雙酶切分析和

3、PCR鑒定，獲得了農(nóng)桿菌LBA4404工程菌； (4)建立了適合河南大豆遺傳多樣性的RAPD分析體系；并用該體系從73種隨機引物，經(jīng)過二次篩選，得到12種隨機引物擴增出了較穩(wěn)定的DNA條帶，大小在0.2～5Kb之間；每種引物擴增出的條帶數(shù)在4～9條之間，共計擴增出67條帶，其中多態(tài)性條帶51條，多態(tài)性指數(shù)為76.12％。利用SPSS11.0軟件進行統(tǒng)計分析和聚類分析的結(jié)果表明所有樣品的相似系數(shù)都在0.528和0.776之間，平均