FEN1在胃癌中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響.pdf

1、目的：
　　胃癌為全球第4大常見(jiàn)的惡性腫瘤，同時(shí)也是第2大腫瘤相關(guān)的致死性疾病。能顯示胃癌患者預(yù)后的生物標(biāo)志物正成為一個(gè)研究熱點(diǎn)。瓣?duì)顑?nèi)切核酸酶1(flapendonuclease1，F(xiàn)EN1)是一種結(jié)構(gòu)特異性的核酸酶，它主要參與堿基切除修復(fù)(baseexcision repair, BER)中的長(zhǎng)片段切除修復(fù)(Long patch base excision repair，LP-BER)，同時(shí)還參與DNA復(fù)制叉的維持和促進(jìn)細(xì)胞凋

2、亡誘導(dǎo)的DNA片段生成，DNA復(fù)制時(shí)岡崎片斷成熟過(guò)程中RNA引物的切除，DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)的分解等過(guò)程。在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中，體內(nèi)外的致癌因素共同作用，導(dǎo)致了基因組DNA發(fā)生了廣泛性損傷，基因組不穩(wěn)定性逐漸上升。作為堿基切除修復(fù)中長(zhǎng)片段切除修復(fù)通路的重要分子，F(xiàn)EN1可以參與到對(duì)DNA損傷的修復(fù)過(guò)程中來(lái)。有大量的研究表明，F(xiàn)EN1在很多腫瘤，如:肺癌、胰腺癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、胃癌、前列腺癌中皆存在高表達(dá)，并在腫瘤患者的預(yù)后中具有重要的標(biāo)志物

3、作用。有學(xué)者通過(guò)免疫組化對(duì)高加索胃癌人群中FEN1表達(dá)進(jìn)行分析:FEN1高表達(dá)的胃癌患者T分期高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性率高，疾病特異性生存期(Disease specific survival，DSS)及無(wú)病生存期（Disease free survival，DFS）短。但目前對(duì)于東方人群中FEN1與胃癌的預(yù)后的關(guān)系仍無(wú)相關(guān)報(bào)道。
　　在本研究中，我們利用免疫組織化學(xué)方法通過(guò)研究FEN1在胃癌術(shù)后患者的石蠟切片中表達(dá)水平，探索FEN1在

4、胃癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系及對(duì)胃癌術(shù)后患者預(yù)后的影響。
　　方法：
　　收集2006年5月至2008年9月于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行胃癌根治術(shù)的136例中晚期原發(fā)性胃癌石蠟組織標(biāo)本，制作成組織芯片。所有患者均未行內(nèi)鏡下黏膜切除術(shù)、姑息性切除術(shù)及術(shù)前化療，均具備詳細(xì)的臨床資料，腫瘤按照AJCC(American Joint Committee on Cancer)（第7版）標(biāo)準(zhǔn)確定分期。所有患者均采用電話隨訪，隨訪日期

5、從患者手術(shù)之日，每年隨訪一次，數(shù)據(jù)隨訪時(shí)間截止到2011年7月，總生存期(OS)設(shè)定為自手術(shù)當(dāng)日至患者死亡、隨訪結(jié)束或失訪的時(shí)間。經(jīng)過(guò)中位時(shí)間為34.30個(gè)月（4-62個(gè)月）的隨訪后，136例胃癌患者內(nèi)66例患者(48.5％)仍然生存;70例患者(51.5％)死于疾病進(jìn)展。所有石蠟組織標(biāo)本均由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院病理科獲得，切片的組織病理學(xué)特征由3名病理學(xué)家分別判讀。
　　將136例胃癌組織標(biāo)本制作成組織芯片，F(xiàn)EN1的檢測(cè)應(yīng)

6、用免疫組化鏈霉素抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶(S-P)法，實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行操作，并用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。
　　在鏡下一個(gè)組織微陣列內(nèi)記錄FEN1陽(yáng)性的細(xì)胞染色強(qiáng)度及所占百分比并記錄評(píng)分:染色強(qiáng)度評(píng)分:0-3分（0，陰性;1，淡黃色;2，棕黃色;3，棕褐色）。陽(yáng)性細(xì)胞百分比（0，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞;1，＜10％陽(yáng)性細(xì)胞;2，11-50％陽(yáng)性細(xì)胞;3，51-80％陽(yáng)性細(xì)胞;4，＞80％陽(yáng)性細(xì)胞）。并將得分相乘計(jì)算最終得分（陰性，0

7、-1;弱陽(yáng)性，1-2;中等陽(yáng)性，2-3;強(qiáng)陽(yáng)性，≥3）。將＞1分均設(shè)定為陽(yáng)性，最終結(jié)果選取芯片兩點(diǎn)得分平均值記錄。
　　所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)均采用SPSS20.0進(jìn)行分析，①采用X2檢驗(yàn)分析比較FEN1蛋白表達(dá)與胃癌患者疾病特征（性別，年齡，分化程度，D2切除與否，Lauren分型，腫瘤位置，TNM分期，腫瘤原發(fā)灶情況，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及是否有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等）的關(guān)系;②生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法及Log-rank檢驗(yàn);③采用CO

8、X模型對(duì)胃癌患者預(yù)后相關(guān)因素進(jìn)行多因素回歸分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所有檢驗(yàn)和P值均為雙側(cè)。
　　結(jié)果：
　　1、中晚期原發(fā)性胃癌術(shù)后患者樣本一共136例。其中男性102人，占75.0％，女性34人，占25.0％;年齡38-78歲，中位年齡60歲。其中＜60歲66人，占48.5％，≥60歲70人，占51.5％;腫瘤分化程度好4例，占2.9％，中等30例，占22％，分化程度差100例，占73.5％，有2例缺失;未行

9、D2切除5例，占3.7％，行D2切除131例，占96.3％; Lauren分型中腸型59例，占43.4％，彌漫型77例，占56.6％;腫瘤位于胃底及胃角處8例，占5.9％，位于胃體35例，占25.7％，位于幽門及胃竇處93例，占68.4％; TNM分期Ⅰ期5例，占3.7％，Ⅱ期25例，占18.4％，Ⅲ期101例，占74.3％，Ⅳ期4例，占2.9％;其中T分期pT11例，占0.7％，pT210例，占7.4％，pT317例，占12.5％，

10、pT4期107例，占78.7％，有1例缺失;無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，占22.8％，pN120例，占14.7％，pN233例，占24.3％，pN352例，占38.2％，;無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移132例，占97.1，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移4例，占2.9％。
　　2、鏡下FEN1蛋白陽(yáng)性表達(dá)為棕黃色顆粒，主要位于細(xì)胞核，極少部分見(jiàn)于細(xì)胞漿。136名胃癌患者中有87人FEN1蛋白表達(dá)陽(yáng)性，陽(yáng)性表達(dá)率為64.0％。
　　3、通過(guò)X2檢驗(yàn)分析得到FEN1蛋白的表達(dá)僅

11、與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)(p=0.013);而與患者的性別、年齡、分化程度、D2切除與否、Lauren分型、腫瘤位置、TNM分期及腫瘤原發(fā)灶情況等的相關(guān)性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、Kaplan-Meier生存曲線分析結(jié)果顯示FEN1蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者的中位生存時(shí)間為34.30個(gè)月，而陰性組中位生存時(shí)間沒(méi)有達(dá)到。FEN1蛋白表達(dá)陽(yáng)性患者的總生存期(OS)較陰性組縮短(P=0.009)。將FEN1表達(dá)、性別，年齡，分化程度

12、，D2切除與否，Lauren分型，腫瘤位置，腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移納入COX比例風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行單因素分析。結(jié)果顯示:FEN1表達(dá)(P=0.011)、TNM分期(P＜0.001)、腫瘤浸潤(rùn)深度(P=0.004)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.002)均為影響腫瘤患者預(yù)后的因素。將以上影響因素納入到多因素分析，結(jié)果顯示:FEN1表達(dá)(P=0.022)及TNM分期(P＜0.001)均為影響胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立性因素。進(jìn)一步對(duì)不同的臨床病理參數(shù)間

13、FEN1表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響進(jìn)行亞組分析示，在Ⅲ-Ⅳ期、pT4及pN1-3的患者中，F(xiàn)EN1陽(yáng)性患者較FEN1陰性患者預(yù)后更差;在Ⅰ-Ⅱ期、pT1-3及pN0的患者中，F(xiàn)EN1陽(yáng)性患者預(yù)后與FEN1陰性組患者差異不明顯。而在芯片分化程度、Lauren分型、腫瘤部位的不同參數(shù)間FEN1表達(dá)陽(yáng)性的患者預(yù)后均較差。
　　結(jié)論：
　　1、胃癌組織中FEN1蛋白的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示FEN1表達(dá)與胃癌患者的惡性生物