從Toll樣受體通路探討加味桔梗湯治療內(nèi)毒素致急性肺損傷的作用機制.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、急性肺損傷(acute lung injury,ALI)是指由心源性以外的各種肺內(nèi)、外致病因素所導致的急性、進行性、缺氧性呼吸衰竭。其發(fā)病機理錯綜復雜,迄今尚未完全闡明,亦無滿意的治療措施,病死率高達50%。根據(jù)其臨床表現(xiàn),ALI當屬中醫(yī)學“肺熱證”、“喘證”、“結胸”等范疇。近年來,中醫(yī)藥工作者結合現(xiàn)代醫(yī)學對ALI發(fā)病機制的研究新進展,采用辨病與辨證相結合,從熱毒論治ALI,雖取得了一定療效,但并未顯著降低其死亡率;因此,深入研究AL

2、I的中醫(yī)發(fā)病機制并在其指導下尋找有效方藥,是其治療研究中的新途徑和優(yōu)勢所在。 有資料表明,引發(fā)ALI的致病菌中,G<'->占檢出病菌的70%~80%,內(nèi)毒素脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是G<'->的主要抗原性及致病性成分,而 Toll樣受體4(toll-1ikereceptor 4,TLR4)是LPS的跨膜信號轉(zhuǎn)導受體,因此,TLR4介導的LPS信號轉(zhuǎn)導通路在ALI發(fā)生發(fā)展過程中的應起重要作用。這一理論

3、亦體現(xiàn)了從治“人的病”到治“病的人”的治療策略的轉(zhuǎn)變,提示我們應重視中醫(yī)肺生理病理與ALI發(fā)病之間的關系?;谝陨险J識,本課題提出肺失宣降、邪毒壅肺、氣機逆亂是ALI的中醫(yī)發(fā)病機制,而宣肺解毒法順應肺之生理、契合病機是ALI早期階段的基本治療原則,以此為指導思想的加味桔梗湯亦有望是治療ALI的有效方藥。 目的 1.探討TLR4介導的LPs信號轉(zhuǎn)導通路在ALI發(fā)生發(fā)展中的作用; 2.闡釋中醫(yī)肺生理病理與ALI發(fā)病之

4、間的關系,揭示肺臧象理論及ALI相關病機的現(xiàn)代生物學基礎; 3.探討“宣肺解毒”治療早期ALI的可行性及科學性; 4.從整體、細胞、分子水平闡明加味桔梗湯治療LPs致ALI的作用機制,為臨床防治ALI提供實驗依據(jù)。 方法 1 理論研究 基于中醫(yī)肺臧象理論與ALI發(fā)病之間的關系及仲景宣肺法證治概要,從理論上探討“宣肺解毒”治療早期ALI的科學性和可行性,并進一步闡釋加味桔梗湯治療ALl的理論依據(jù)。

5、 2 實驗研究 2.1 加味桔梗湯治療LPs致急性腫損傷大鼠的藥效學研究 健康雄性SD大鼠90只,隨機分為正常組(9只)、模型組(27只)、清熱解毒組(27只)、宣腫解毒組(27只)。清熱解毒組灌服黃芩清腫飲(由黃芩、梔子等組成),宣肺解毒組灌服加味桔梗湯(由桔梗、生甘草、黃芩、梔子等組成),其余兩組灌服生理鹽水,共6天。第7天,除正常組外,其余各組一次性股靜脈注射LPS(4.9mg/kg),正常組一次性股靜脈注射

6、等量的生理鹽水,觀察并記錄各組大鼠癥狀體征改變。除正常組外,其余三組動物于造模后2h、4h和6h隨機分三批處死,其中3只麻醉后,用4%多聚甲醛經(jīng)右心室灌洗后固定,制成光鏡標本;6只麻醉后,快速開胸取肺,稱重后投入液氮速凍。通過檢測肺系數(shù)、肺含水量、肺組織勻漿髓過氧化物酶含量等來評價黃芩清肺飲及加味桔梗湯對LPS致急性肺損傷大鼠的治療作用。 2.2 加味桔梗湯治療LPS致急性肺損傷的機制研究 分組及造模方法等均同藥效學實驗

7、。用生化法測定肺組織勻漿SOD、MDA及血清NO、NOS、iNOS的含量;用雙抗體夾心-酶聯(lián)免疫吸附(ABC-ELISA)法檢測血清TNF-α、IL-1β、IL-6、及IL-10的含量;用Western-blot及免疫組織化學法測定肺組織NF—kB的蛋白表達;用RT-PCR法測定肺組織TLR4 mRNA的表達。 結果 1 理論研究 ALI的發(fā)生發(fā)展與中醫(yī)肺之生理病理密切相關:ALI病位在肺;邪毒襲肺、肺失宣降是A

8、LI發(fā)生的病理基礎;正邪交爭、內(nèi)生之毒續(xù)生,毒邪壅肺、氣機逆亂是ALI加重的病理環(huán)節(jié);治節(jié)失司、肺不主氣是ALI轉(zhuǎn)危之關鍵;宣肺解毒是ALl早期階段的重要治療原則;以宣肺解毒法為指導思想的加味桔梗湯順應肺臧生理、契合病機,可有效改善ALI時肺臟功能失調(diào)。 2 實驗研究 通過以上實驗得到以下結果: 1.中性粒細胞于肺內(nèi)“扣押”是LPS致急性肺損傷的啟動及進行階段中的早發(fā)事件,其引起的肺血管內(nèi)皮細胞、肺泡上皮細胞廣泛

9、損傷是導致肺通透性增加,肺水腫及微血栓形成的關鍵所在; 2.LPS致急性肺損傷發(fā)生發(fā)展過程中存在氧化/抗氧化平衡紊亂; 3.LPS致急性肺損傷發(fā)生發(fā)展過程中存在致炎反應/抗炎反應平衡紊亂:TNF—α、IL-1β大量、快速表達是單核巨噬細胞活化的分子標志;IL—10在ALI早期的高表達預示著機體的免疫功能紊亂; 4.LPS致急性肺損傷時,存在NF-kB由細胞漿向細胞核的轉(zhuǎn)移,其激活在LPS致急性腫損傷發(fā)病中起核心作

10、用; 5.Toll樣受體不僅是抵抗外邪侵襲的第一道防線,而且是機體先天免疫與繼發(fā)免疫之間的橋梁。ALI時,肺組織TLR4 mRNA的大量表達是加重ALI的病理過程中急性炎癥反應網(wǎng)絡的重要扳機點之一; 6.以宣肺解毒為指導思想的加味桔梗湯治療LPs致急性肺損傷的機制主要為: (1)減少中性粒細胞在肺內(nèi)的黏附和聚集,從而減少其對腫組織的浸潤; (2)促進機體產(chǎn)生抗氧化因子,提高機體對氧自山基的清除能力,調(diào)節(jié)氧

11、化/抗氧化平衡; (3)顯著降低LPS致急性肺損傷大鼠血清中致炎因子TNF—α、IL-1β及抗炎因子IL-10的含量; (4)抑制LPS致急性肺損傷肺組織NF-kB p65由胞漿向胞核轉(zhuǎn)移,阻斷眾多炎性因子的表達; (5)抑制LPS致急性肺損傷大鼠肺組織TLR4 mRNA基因表達,調(diào)控NF-kB等轉(zhuǎn)錄因子的激活。 結論 綜合理論及實驗研究結果,得出以下結論: 1 宣肺解毒治療早期ALI的可

12、行性及科學性基于中醫(yī)肺藏象理論與ALI發(fā)病之間的關系,認為ALI病位在肺,病機關鍵是邪毒犯肺、肺失宣降;而全身氣血津液運行輸布障礙,熱、瘀、毒、水(或痰、濕、飲)等病理產(chǎn)物驟生,壅阻肺絡、氣機逆亂是其發(fā)展加重的核心環(huán)節(jié);正虛邪盛、治節(jié)失司、肺不主氣是ALI轉(zhuǎn)危之關鍵。這一中醫(yī)學發(fā)病機制提示肺生理功能在ALl發(fā)生發(fā)展中起重要作用,并啟發(fā)了治療ALI早期階段的根本原則——宣肺解毒??傊?,從理論上講,早期宣肺解毒的治療原則不但突破了過于強調(diào)熱

13、毒致病的傳統(tǒng)理論,而且是仲景治療肺系疾病時重在宣肺祛邪這一指導思想的繼承和發(fā)揚。 2 中醫(yī)學肺藏象理論與ALl相關病理環(huán)節(jié)的現(xiàn)代生物學基礎ALI發(fā)病過程中伴氧自由基大量生成、炎癥因子的過度表達、細胞凋亡等多種病理反應,其復雜性表明,LPS致急性肺損傷存在多種病理環(huán)節(jié),臨床應采用綜合療法,多靶點治療原則。因此,深入系統(tǒng)研究TLR4介導的內(nèi)毒素信號轉(zhuǎn)導途徑不但為臨床控制急性肺損傷時瀑鏈式炎癥反應提供切入點,而且部分揭示了中醫(yī)學肺衛(wèi)相

14、關、毒邪致病及肺主治節(jié)等宏觀理論與Toll樣受體通路這一微觀層次的病理機制之間的生物學基礎,構建了ALI發(fā)病宏觀病機與微觀病機之間的橋梁。 3 加味桔梗湯治療LPS致急性肺損傷的藥理學機制肺失宣降、邪毒壅肺、氣機逆亂是ALI的核心病理環(huán)節(jié),而邪毒是導致ALI損傷的重要因素。因此,在ALI早期,應宣肺解毒、截斷病程;宣肺以解毒,解毒以宣肺,恢復肺臟生理功能。另外,復方中藥配伍的協(xié)同作用可體現(xiàn)在不同病理環(huán)節(jié)、不同靶點生物學效應等方面

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