CXCR4內(nèi)毒素急性肺損傷作用機制研究.pdf

1、第一部分內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠肺組織CXCR4的表達及其作用 [目的] 通過檢測內(nèi)毒素急性肺損傷(acutelunginjuryALI)時肺組織CXCR4的表達，研究其與炎癥細胞因子的表達以及肺損傷病理指標變化之間的關(guān)系，探討其在內(nèi)毒素引起ALI過程中的作用。 [方法] 將SD大鼠分為5組：①對照組、②2h組、③4h組、④8h組、⑤12h組。尾靜脈注射LPS，復(fù)制ALI模型。在LPS注射后2、4、8、12小

2、時分別用免疫組化、WesternBlot及RT-PCR法檢測CXCR4、SDF-1α、TNF-α、IL-1β及IL-18在大鼠肺組織中的表達。 [結(jié)果] SD大鼠肺組織中存在有CXCR4及SDF-1α的表達。LPS導(dǎo)致ALI時，CXCR4及SDF-1α蛋白和mRNA表達明顯升高(P＜0.05)，且與TNF-α、IL-1β及IL-18的表達具有相同的變化趨勢。 [結(jié)論] LPS能促進大鼠肺組織CXCR4及S

3、DF-1α的表達，進而引起大量炎癥細胞因子的釋放，造成肺組織損害。CXCR4及SDF-1α可能在LPS引起ALI過程中發(fā)揮重要作用。 第二部分LPS作用下大鼠肺泡巨噬細胞CXCR4的表達及作用 [目的] 研究LPS作用下體外培養(yǎng)的肺泡巨噬細胞中CXCR4的表達變化與細胞因子表達間的關(guān)系，并通過應(yīng)用CXCR4阻斷劑AMD3100干預(yù)LPS對巨噬細胞的作用，檢測CXCR4與細胞因子的表達變化，進一步探討CXCR4在L

4、PS激活炎癥細胞因子過程中的作用。 [方法] 將分離培養(yǎng)的大鼠肺泡巨噬細胞隨機分組： (1)單獨應(yīng)用LPS刺激肺泡巨噬細胞。 (2)用AMD3100預(yù)處理肺泡巨噬細胞30min后，再以LPS刺激肺泡巨噬細胞。 (3)同時應(yīng)用AMD3100和LPS刺激肺泡巨噬細胞。 (4)LPS刺激肺泡巨噬細胞30min后，再用AMD3100作用于肺泡巨噬細胞。 在LPS刺激肺泡巨噬細胞后，分別應(yīng)用

5、ELISA、WesternBlot及RT-PCR法檢測肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6濃度以及肺泡巨噬細胞CXCR4蛋白和mRNA表達的變化。 [結(jié)果] LPS刺激肺泡巨噬細胞后不同時間CXCR4蛋白和mRNA表達以及肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度與正常對照組相比均明顯增加(P＜0.05)。 AMD3100預(yù)處理、AMD3100與LPS同時應(yīng)用及AMD3100遲后于LPS應(yīng)用時，在LPS作

6、用下，CXCR4蛋白和mRNA均較正常對照組明顯增加(P＜0.05)，與單獨應(yīng)用LPS時相比，CXCR4蛋白和mRNA在各時點的表達無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 AMD3100預(yù)處理與正常對照組相比，肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度均稍增加，差異無顯著性(P＞0.05)；與單獨應(yīng)用LPS刺激時相比，培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度降低，差異有顯著性(P＜0.05)。AMD3100預(yù)處理同與LPS同時應(yīng)用相比，培

7、養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度稍低，差異有顯著性(P＜0.05)。 AMD3100遲后于LPS應(yīng)用時，與正常對照組相比，肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度均較正常對照組增加，差異有顯著性(P＜0.05)，與單獨應(yīng)用LPS刺激時相比，肺泡巨噬細胞培養(yǎng)液中TNF-α和IL-6的濃度降低，但差異無顯著性(P＞0.05)。 [結(jié)論] LPS能夠刺激肺泡巨噬細胞CXCR4的表達，進而產(chǎn)生大量炎癥細胞因子。AM

8、D3100阻斷CXCR4后，能夠抑制LPS引起的炎癥細胞因子釋放，表明CXCR4可能在LPS的受體識別及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮作用。 第三部分CXCR4在內(nèi)毒素耐受性中的作用機制 [目的] 通過檢測LPS預(yù)處理后LPS作用下肺組織和體外培養(yǎng)的巨噬細胞中CXCR4的表達，研究CXCR4與炎癥細胞因子表達之間的關(guān)系以及LPS預(yù)處理對內(nèi)毒素急性肺損傷的影響，更進一步探討CXCR4在內(nèi)毒素引起ALI過程中的作用。 [

9、方法] (一)CXCR4在LPS預(yù)處理肺組織的表達 將SD大鼠隨機分組： (1)LPS組以5mg/kg尾靜脈注射LPS，復(fù)制ALI模型。 (2)LPS預(yù)處理組首次經(jīng)腹腔注射LPS(0.25mg/kg)，24小時后再經(jīng)腹腔注射LPS(0.5mg/kg)，第2次腹腔注射72小時后，經(jīng)尾靜脈注射LPS(5mg/kg)。 尾靜脈注射LPS后2、4、8、12小時分別用免疫組化、WesternBlot及RT-

10、PCR法檢測CXCR4、TNF-α、IL-1β及IL-18在大鼠肺組織中的表達。 (二)CXCR4在LPS預(yù)處理肺泡巨噬細胞的表達 將培養(yǎng)好的肺泡巨噬細胞隨機分組： (1)LPS刺激肺泡巨噬細胞后4小時，檢測肺泡巨噬細胞細胞因子(TNF-α、IL-1β及IL-18)和CXCR4表達的變化。 (2)LPS預(yù)先刺激培養(yǎng)12小時，再用LPS刺激肺泡巨噬細胞4小時后，檢測肺泡巨噬細胞細胞因子(TNF-α、IL-1