血管緊張素Ⅱ及其受體在大鼠內(nèi)毒素性急性肺損傷中的作用.pdf

1、研究背景 腎素一血管緊張素系統(tǒng)(RAS)與血管內(nèi)皮損傷過程密切相關(guān)，其主要效應(yīng)分子血管緊張素II(AngⅡ)有顯著的促血管內(nèi)皮炎性損傷作用。感染是急性肺損傷(ALl)最常見的病因，已知革蘭陰性(G-)菌內(nèi)毒素(LPS)在嚴(yán)重感染時可致肺微血管內(nèi)皮通透性增高，進(jìn)而形成肺水腫；同時LPS還激活循環(huán)和肺組織的RAS，導(dǎo)致AngII水平升高，據(jù)此我們推測AngII可能參與LPS致ALl的發(fā)生、發(fā)展過程。在各種原因所致ALl中，肺微血管內(nèi)

2、皮細(xì)胞(PMVEC)的損傷首先出現(xiàn)，為進(jìn)一步闡明AngⅡ?qū)MVEC的作用機制，我們探討AngⅡ受體在大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(RPMVEC)的分布及調(diào)控特征，并進(jìn)一步研究AngⅡ及其受體在大鼠內(nèi)毒素性ALI病理過程中的作用。 研究內(nèi)容 本研究分兩個階段。實驗第一階段在體外成功分離、培養(yǎng)RPMVEC的基礎(chǔ)上進(jìn)行，內(nèi)容包括：(1)采用RT-PCR、Westernblot和放射性配基結(jié)合分析法，分別檢測AngII受體的mRNA、

3、蛋白表達(dá)水平以及受體的結(jié)合活性；(2)觀察以LPS／AngII干預(yù)RPMVEC之后，AngII受體mRNA和蛋白表達(dá)水平的變化。 實驗第二階段分別在大鼠的內(nèi)毒素性ALI模型以及RPMVEC中進(jìn)行，內(nèi)容包括： (1)測定內(nèi)毒素性ALl大鼠肺組織中AngⅡ水平；(2)在LPS致大鼠ALI模型上以①肺組織濕／干重比；②組織病理學(xué)檢查；③伊文思藍(lán)(EB)熒光定量的方法，分別觀測LPS和／或AngⅡ?qū)Υ笫蠓谓M織微血管內(nèi)皮通透屏障的

4、影響，以及AngⅡ受體拮抗劑的干預(yù)作用；(3)在RPMVEC單層水平上分別觀察LPS和／或AngⅡ?qū)螌油ㄍ感缘挠绊?，以及AngⅡ受體拮抗劑的干預(yù)作用；(4)應(yīng)用流式細(xì)胞儀和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)，進(jìn)行定量分析及形態(tài)學(xué)研究，觀察LPS和／或AngⅡ?qū)PMVEC細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)F-actin的影響，以及AngII受體拮抗劑的干預(yù)作用。 結(jié)論 (1)RPMVEC存在AT1-R，無AT2-R分布。 (2)AngI工以濃度一

5、時間依賴的方式下調(diào)RPMVEC上ATl-RmRNA表達(dá)水平；10-VM的AngII作用RPMVEC后，ATl-R蛋白表達(dá)水平也顯著降低。表明外源性AngII對AT1-R有下調(diào)作用。 (3)LPS以濃度依賴的方式上調(diào)ATl-RmRNA表達(dá)水平。以LPS(10μg/m1)處理RPMVEC后，ATl-R蛋白表達(dá)水平也顯著增高。表明LPS對ATl-R有上調(diào)作用。 (4)LPS可致大鼠肺組織濕／干重比、肺微血管蛋白滲出量顯著增高，

6、給予ATl一R拮抗劑[Sar1，I1e8]AngH干預(yù)對上述變化有明顯的緩解作用。 (5)大鼠內(nèi)毒素性ALI模型中肺組織AngⅡ水平增高。 (6)在體外培養(yǎng)的RPMVEC單層上，LPS表現(xiàn)出對細(xì)胞的直接毒性作用，可引起細(xì)胞單層滲透系數(shù)K，顯著增加，ATl-R拮抗劑對LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性損傷有保護(hù)作用。 (7)AngⅡ不僅對LPS的致通透性損傷作用具有協(xié)同效應(yīng)，而且可單獨引起RPMVEC單層通透系數(shù)Kf增