CD134單抗對SLE患者外周血單個核細胞穿孔素表達及其活性的影響.pdf

1、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus，SLE)是一種累及全身各個系統(tǒng)的自身免疫性疾病。其慢性化臨床表現(xiàn)至今仍是對多數(shù)臨床工作者的挑戰(zhàn)。SLE以育齡期女性高發(fā)，可以引起流產(chǎn)、死胎和新生兒狼瘡，造成嚴重社會危害。目前以免疫抑制治療為主，小部分患者可長期緩解，一部分患者病情慢性化，還有一部分患者病情急劇惡化，最終死于感染、狼瘡腦病或腎功能衰竭。SLE的病因和發(fā)病機制尚未完全清楚，可能是攜帶某些遺傳因素的易患

2、者，在環(huán)境因素和性激素影響下，發(fā)生了異常的免疫應(yīng)答反應(yīng)。SLE患者循環(huán)B細胞的數(shù)量并未增加，而分化狀態(tài)改變使B細胞處于高度活躍狀態(tài)，患者體內(nèi)可以檢測到多種自身抗體，如抗細胞內(nèi)DNA及多種核蛋白的抗體、抗細胞膜成分的抗體?？贵w與抗原結(jié)合形成的免疫復(fù)合物在靶細胞沉積，造成以Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)為主的免疫損傷。B細胞活躍的一個原因是抗原刺激的結(jié)果，即由于體內(nèi)凋亡的細胞數(shù)增加及受損傷的細胞內(nèi)成分泄漏，形成大量自身抗原：另一個原因是T細胞調(diào)節(jié)障礙，輔助性

3、T細胞(CD4+T細胞)參與自身抗原的識別<'[1,2]>。T細胞功能異常是SLE發(fā)病機制的中心環(huán)節(jié)。動物實驗表明CD8+T細胞參與了SLE的發(fā)病，或者作為細胞反應(yīng)的有毒成分直接參與，或者通過克服耐受自身抗原的機制間接參與<'[3,4]>。在實驗性SLE模型中，清除了主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ抗原表達缺陷的CD8+T細胞的小鼠對疾病有抵抗性<'[5]>。敲除了主要組織相容性復(fù)合體I(β<,2>微球蛋白)基因的NZB小鼠與正常NZB小鼠相比抗

4、紅細胞抗體產(chǎn)生延遲、滴度下降<'[6]>。而如果敲除了Ⅰ型干擾素受體基因，不僅NZB小鼠脾臟中的CD8+細胞明顯減少，而且會減輕SLE的病情<'[7]>。最近，Blanco等的研究發(fā)現(xiàn)在SLE病人體內(nèi)CD8+細胞毒T淋巴細胞的數(shù)量和功能均增加，不僅與疾病的活動性呈很強的相關(guān)性，而且促進了患者體內(nèi)大量自身抗原的產(chǎn)生<'[8]>?；罨腃D8+T細胞不僅參與了SLE的發(fā)病，而且表達穿孔素，Michael等發(fā)現(xiàn)PF陽性T細胞都是cD8陽性細胞

5、毒T細胞，并且通過體外實驗證實應(yīng)用特異性抗體刺激后PF陽性T細胞的數(shù)量隨之增加，因而可以將穿孔素作為CD8+T細胞活化的標(biāo)志<'[9]>。穿孔素(Perforin，PF)又稱為孔形成蛋白(pore-forming protein，PFP)，是一種糖蛋白，主要存在于細胞毒性T細胞(cytotoxic T lymphocytes，CTL)和NK細胞胞漿顆粒中，能在靶細胞膜上聚集形成孔道。無機離子及過多的水分通過孔道進入細胞，導(dǎo)致細胞腫脹，某

6、些酶和細胞因子，也可以有孔道進入，共同促成細胞死亡。細胞死亡的方式分為以上兩種：①細胞凋亡，是一種由基因控制的細胞自主性死亡過程。凋亡過程中細胞膜和核膜保持完整，不引起炎癥反應(yīng)。②細胞壞死，是細胞突發(fā)性病理性死亡或生理環(huán)境急劇變化(如高熱、缺氧等)所致。壞死過程中細胞發(fā)生不可逆的變性，最終細胞解體，釋放細胞內(nèi)容物包括溶酶體酶，誘發(fā)鄰近組織炎癥反應(yīng)。有人對系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者淋巴細胞凋亡及其與自身抗體的關(guān)系進行研究，認為SLE活動期患者細胞

7、凋亡加快，凋亡過程中暴露出．許多自身抗原刺激免疫細胞產(chǎn)生抗體。SLE往往表現(xiàn)為多個器官的持續(xù)性炎癥反應(yīng)，未發(fā)現(xiàn)抗原抗體復(fù)合物沉積的部位如心肌也有炎癥反應(yīng)發(fā)生，與凋亡理論認為凋亡過程不引起炎癥反應(yīng)相矛盾。而細胞壞死釋放細胞碎片，刺激自身免疫應(yīng)答，似乎更能較全面的解釋炎癥性細胞因子和大量自身抗體的產(chǎn)生。PF既能導(dǎo)致細胞溶解性壞死又誘發(fā)細胞凋亡。對sLE活動期患者外周血單個核細胞PF mRNA的檢測發(fā)現(xiàn)，患者PFmRNA的表達水平升高，且與疾

8、病活動度正相關(guān)。但是同時測定NK細胞的殺傷活性，發(fā)現(xiàn)SLE活動期患者的NK細胞殺傷活性低于正常對照組，這一結(jié)果與NK細胞是釋放PF的主要細胞的觀點相矛盾。Blanco等證實在SLE患者體內(nèi)不僅CD8+T細胞數(shù)量增加，PF的數(shù)量亦隨之增加<'[8]>。PF在SLE發(fā)病中的作用已經(jīng)證明<'[10]>，所以PF可能成為這類疾病治療的新靶點<'[11]>。有人發(fā)現(xiàn)腫瘤壞死因子受體(tumor necrosisfactor receptor，TN

9、FR)超家族成員可以抑制PF的表達。Muta等在體外實驗中用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chainreaction，RT-PCR)的方法證實CD30下調(diào)PF mRNA的表達<'[12]>。CD134是TNFR超家族成員之一，為I型跨膜糖蛋白，相對分子質(zhì)量約為48000～50000。人的CD134基因于1994年克隆，長約1.4kb，編碼一個相對分子質(zhì)量為27777的含227個氨

10、基酸的膜蛋白，與其他TNFR超家族成員CD30、4-1BB、TNFR Ⅱ和DR3成簇位于1號染色體lp36的遠側(cè)端，但是否具有和其他同族成員相似的功能，是否可以抑制PF的表達和其活性尚未見報道。本試驗?zāi)康脑谟谟^察SLE患者外周血PF的表達及其活性，證實PF在SLE發(fā)病中的作用；研究CD134單抗對PF表達及其活性的影響，尋找最佳作用濃度及時間，應(yīng)用于SLE患者，并將之與甲基強的松龍(Methylprendisolone，MP)作用相對比