噬血細(xì)胞綜合征穿孔素基因和穿孔素及顆粒酶B表達(dá).pdf

1、目的:了解攜帶穿孔素1(PRF1)基因突變型和無PRF1基因突變的噬血細(xì)胞綜合征(HPS)患兒穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)水平，初步探討PRF1基因變異型和無PRF1基因突變患兒的免疫細(xì)胞功能與臨床表現(xiàn)的關(guān)系。
　　方法:
　　(1)收集在廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科診治的8例(P1-P8)治療后HPS患兒、5例(P1-P5)患者的父母及同胞納入研究，診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)國際組織細(xì)胞病協(xié)會修訂的《HLH-2004診斷和治療指南》。以30名

2、門診體檢正常健康兒童作為正常對照。
　　(2)提取DNA后，采用PCR(polymerasechain reaction)分段擴(kuò)增PRF1、UNC13D(unc-13 homolog D)、STX11(syntaxin11)、STXBP2(syntaxin binding protein2)基因外顯子，直接測序后與基因庫的PRF1、UNC13D、STX11、STXBP2基因序列進(jìn)行在線比對，確定有無相關(guān)的堿基突變及造成的氨基酸改變

3、。
　　(3)通過ExPASy網(wǎng)站在線分析系統(tǒng)進(jìn)行PRF1蛋白構(gòu)象生物信息學(xué)分析。
　　(4)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞（CD8+T細(xì)胞）和NK細(xì)胞穿孔素和顆粒酶B的表達(dá)，以及檢測NK細(xì)胞殺傷活性。
　　結(jié)果:
　　(1)8例患兒中有3例存在PRF1外顯子編碼區(qū)雜合錯義突變:P1為復(fù)合雜合錯義突變R4C和R33H，其父、兄也存在相同突變;P2為雜合錯義突變V50L，其母、弟也存在相同突變;P3為雜合錯義突

4、變R489W，其父不存在R489W，其母未參與檢測，推測其突變來自母親;另外3個基因未見突變，可明確診斷為家族性HPS第2亞型(FHL2)。
　　(2) P1及其父、兄以及P2及其母、弟的外周血CD8+T細(xì)胞穿孔素陽性率(0-1.48％)和NK細(xì)胞的穿孔素陽性率（8.69％-32.1％）較正常對照組明顯減少（分別為20％-30％、77％-95％），但兩組間表達(dá)顆粒酶B未見明顯差異。
　　(3) P1-P8的NK細(xì)胞殺傷活性與