SLE患者T淋巴細(xì)胞穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域甲基化水平及其意義.pdf

1、目的：(1)研究SLE患者外周血CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素基因表達(dá)水平。(2)研究SLE患者CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素基因表達(dá)與穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化水平的關(guān)系。(3)探討CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化狀態(tài)在SLE發(fā)病機(jī)制中的作用。 方法：(1)分離6例活動(dòng)期SLE患者和5例正常對(duì)照者外周血CD4<'+>與CD8<'+>T淋巴細(xì)胞，

2、并分別提取DNA，RNA和蛋白質(zhì)。(2)采用實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)(real time RT-PCR)技術(shù)，分別檢測(cè)6例活動(dòng)期SLE患者和5例正常對(duì)照者的外周血CD4<'+>與CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素基因的mRNA表達(dá)水平。(3)采用免疫印跡法(Western blotting)，分別檢測(cè)5例活動(dòng)期SLE患者和5例正常對(duì)照者的外周血CD4<'+>與CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素蛋白的表達(dá)水平。(4)采用亞硫酸鈉-測(cè)序法，對(duì)6

3、例活動(dòng)期SLE患者和5例正常對(duì)照者的外周血CD4<'+>與CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA甲基化水平進(jìn)行檢測(cè)。 結(jié)果：(1)活動(dòng)期SLE患者CD4<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素mRNA的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照者(p<0.05)；活動(dòng)期SLE患者CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素mRNA的表達(dá)水平明顯低于正常對(duì)照者(p<0.05)。(2)活動(dòng)期SLE患者CD4<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素蛋白的表達(dá)水平明顯高于正常對(duì)照

4、者(p<0.05);活動(dòng)期SLE患者CD8<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素蛋白的表達(dá)水平與正常對(duì)照者沒有顯著性差異(p>0.05)。(3)活動(dòng)期SLE患者CD4+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA平均甲基化水平明顯低于正常對(duì)照者(p<0.05);正常對(duì)照者的CD4+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA平均甲基化水平明顯高于其CD8+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA平均甲基化水平(p<0.05);活動(dòng)期SLE患者與正常對(duì)照者的CD8+

5、T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域DNA平均甲基化水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。 結(jié)論：(1)活動(dòng)期SLE患者的CD4<'+>T淋巴細(xì)胞穿孔素過(guò)度表達(dá)。(2)活動(dòng)期SLE患者的CD4+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域處于低甲基化狀態(tài)。(3)活動(dòng)期SLE患者的CD4+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域低甲基化狀態(tài)可能導(dǎo)致穿孔素的過(guò)度表達(dá)。(4)活動(dòng)期SLE患者的CD4+T淋巴細(xì)胞的穿孔素基因啟動(dòng)子區(qū)域低甲基化狀態(tài)在SLE