一個(gè)先天性垂體性侏儒癥家系的分子遺傳學(xué)分析.pdf

1、先天性垂體性侏儒癥是指下丘腦、垂體前葉病變引起的生長(zhǎng)激素分泌節(jié)律、數(shù)量的異常、生長(zhǎng)激素受體缺陷，或受體后信息傳遞障礙等所引起的生長(zhǎng)發(fā)育遲緩性疾病。先天性垂體性侏儒癥包括兩種類型：?jiǎn)我恍陨L(zhǎng)激素缺乏癥(Isolated Growth Hormone Deficiency，IGHD)和垂體激素缺乏綜合癥(Combined Pituitary Hormone Deficiency，CPHD)，IGHD又分為IGHD IA型，IGHD IB型，

2、IGHD II型，IGHD III型。目前對(duì)垂體性侏儒癥的治療主要依靠注射生長(zhǎng)激素或者促生長(zhǎng)激素釋放激素來(lái)達(dá)到增長(zhǎng)身高的目的。先天性垂體性侏儒癥的遺傳方式有常染色體顯性遺傳，常染色體隱性遺傳和X染色體遺傳，其中常染色體隱性遺傳是最常見的一種，目前已發(fā)現(xiàn)該疾病的致病基因有17個(gè)。 本課題組在湖北省收集了一個(gè)常染色體隱性遺傳先天性垂體性侏儒癥家系，為了尋找該家系的致病原因，首先對(duì)已發(fā)現(xiàn)17個(gè)與先天性垂體性侏儒癥有關(guān)的基因進(jìn)行連鎖分析

3、，發(fā)現(xiàn)該家系的致病基因與生長(zhǎng)激素釋放激素受體（Growth hormone releasing hormone receptor，GHRHR）基因緊密連鎖，GHRHR基因可能是該家系的致病基因。通過(guò)對(duì)該基因的所有外顯子及外顯子與內(nèi)含子交界處進(jìn)行直接測(cè)序，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的剪接突變IVS8+1G→A，通過(guò)限制性內(nèi)切酶多態(tài)性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析發(fā)現(xiàn)該突變?cè)诩蚁祪?nèi)與

4、疾病共分離，并且在50個(gè)正常人中也未發(fā)現(xiàn)該突變的存在。為了檢測(cè)剪接突變IVS8+1G→A的剪接機(jī)制，從正常人和患者的基因組中分別構(gòu)建一個(gè)包含突變點(diǎn)微小基因，再將構(gòu)建好的基因轉(zhuǎn)染進(jìn)入Hela細(xì)胞模擬人體內(nèi)剪接的方式獲取RNA，進(jìn)行RT-PCR和測(cè)序分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該突變導(dǎo)致剪接方式的改變，形成了5種新的RNA，一種是截短了的將第8號(hào)外顯子刪除的RNA，第二種是加長(zhǎng)了來(lái)自8號(hào)內(nèi)含子的48bp的RNA，第三種是加長(zhǎng)了來(lái)自8號(hào)內(nèi)含子的46bp的R