中國(guó)一個(gè)先天性無虹膜癥家系的臨床分析及其與PAX6基因的相關(guān)性研究.pdf

1、第一章中國(guó)一個(gè)先天性無虹膜癥家系的經(jīng)典遺傳學(xué)及臨床分析
　　 目的：分析中國(guó)一個(gè)先天性無虹膜家系的遺傳模式及其臨床特點(diǎn)。
　　 方法：將就診于中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院門診的一個(gè)先天性無虹膜家系(ANL)進(jìn)行詳細(xì)家系調(diào)查并繪制家系圖譜。對(duì)自愿參加研究的9名患者進(jìn)行詳細(xì)病史采集及眼部檢查。4名可得到清晰黃斑光學(xué)相干斷層掃描(opticalcoherencetomography,OCT)圖像的患者采用儀器自動(dòng)按黃斑9格分區(qū)分析視網(wǎng)膜

2、厚度，取黃斑中央?yún)^(qū)讀數(shù)為中央?yún)^(qū)視網(wǎng)膜厚度，取上方內(nèi)圈、鼻側(cè)內(nèi)圈、下方內(nèi)圈、顳側(cè)內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度平均值為旁中心內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度，取上方外圈、鼻側(cè)外圈、下方外圈、顳側(cè)外圈為旁中心外圈視網(wǎng)膜厚度，同時(shí)隨機(jī)選取10名正常志愿者作為正常對(duì)照。
　　 結(jié)果：先天性無虹膜家系(ANL)符合常染色顯性遺傳模式。ANL家系在相同的家庭條件下年齡大者較年齡小者最佳矯正視力(bestcorrectedvisualacuity,BCVA)差，而在相同年齡的

3、條件下則農(nóng)民家庭視力較工人家庭BCVA差。患者中央?yún)^(qū)視網(wǎng)膜厚度為290.38±12.49μm，旁中心凹內(nèi)圈視網(wǎng)膜厚度為298.34±14.26μm，旁中心凹外圈視網(wǎng)膜厚度為267.22±11.27μm;與正常志愿者比較，前者P＜0.05，后兩者P＞0.05。先證者Ⅲ:9右眼晶體顳下方呈刀削狀，左眼行超聲乳化白內(nèi)障手術(shù)及折疊型人工晶體植入，術(shù)中體會(huì)前囊膜脆弱，術(shù)后眩光現(xiàn)象嚴(yán)重。患者Ⅲ:16同時(shí)患精神分裂癥;患者Ⅳ:18同時(shí)患精神異常，但未

4、分型，還同時(shí)患先天性青光眼?；颊撷?16是隨訪9人中殘存虹膜組織最多者，其左眼虹膜組織較右眼多，且在左眼瞳孔區(qū)鼻上方見瞳孔殘膜。
　　 結(jié)論：(1)先天性無虹膜癥ANL家系遺傳模式為常染色體顯性遺傳;(2)先天性無虹膜癥BCVA隨年齡下降可能與晶體混濁及視網(wǎng)膜的光損傷有關(guān);(3)先天性無虹膜癥黃斑中心凹發(fā)育不良主要表現(xiàn)為黃斑中央?yún)^(qū)明顯增厚，中心凹處存在除神經(jīng)纖維層以外的各層視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu);(4)先天性無虹膜患者晶體形態(tài)可發(fā)育異常，其

5、白內(nèi)障可能在達(dá)到某個(gè)程度后即迅速發(fā)展;(5)先天性無虹膜患者白內(nèi)障手術(shù)時(shí)需綜合考慮前囊膜脆弱及術(shù)后視覺質(zhì)量問題;(6)先天性無虹膜ANL家系內(nèi)存在虹膜形態(tài)及精神疾病的表現(xiàn)型變異;(7)先天性無虹膜患者瞳孔殘膜為發(fā)病機(jī)制的虹膜組織萎縮過多學(xué)說提供支持。
　　 第二章中國(guó)一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系PAX6基因序列及外顯子拷貝數(shù)測(cè)定
　　 目的：確定中國(guó)一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系PAX6基因啟動(dòng)子區(qū)、外

6、顯子、外顯子與內(nèi)含子交界處是否存在基因變異以及外顯子拷貝數(shù)是否有變化。
　　 方法：提取中國(guó)一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性無虹膜家系A(chǔ)NL先證者Ⅲ:9基因組DNA，采用PCR擴(kuò)增直接測(cè)序法測(cè)定其PAX6基因3個(gè)轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體的2個(gè)啟動(dòng)子區(qū)、5'端非編碼區(qū)(5'-untranslatedregion，5'-UTR)、編碼區(qū)(codingregion)、3'端非編碼區(qū)(3'-untranslatedregion，3'-UTR)以及剪接位點(diǎn)的

7、DNA序列，采用實(shí)時(shí)定量PCR(real-timequantitativePCR，qPCR)方法測(cè)定3個(gè)轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體所有外顯子拷貝數(shù)，qPCR采用△△Ct相對(duì)定量數(shù)據(jù)分析方法。
　　 結(jié)果：先證者Ⅲ:9的PAX6基因在轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體3啟動(dòng)子區(qū)檢測(cè)到4個(gè)已報(bào)道的單核苷酸多態(tài)性(Singlenucleotidepolymorphism，SNP)rs1806155、rs5790870、rs1806156、rs1806157和rs180618

8、0，并檢測(cè)到1個(gè)未報(bào)道為SNP但與疾病表型無共分離現(xiàn)象的堿基替換g.-1217C＞T;在第12號(hào)內(nèi)含子檢測(cè)到1個(gè)SNPrs3026393;在3'-UTR檢測(cè)到1個(gè)SNPrs1506。轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體1和轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體2啟動(dòng)子區(qū)因GC含量過高導(dǎo)致PCR經(jīng)反復(fù)優(yōu)化條件仍擴(kuò)增失敗。PAX6基因3個(gè)轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體各外顯子拷貝數(shù)均為雙拷貝。
　　 結(jié)論：先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的致病突變與PAX6外顯子及外顯子內(nèi)含子交界處序列及拷貝數(shù)變異無關(guān)，與轉(zhuǎn)錄異構(gòu)

9、體3啟動(dòng)子區(qū)無關(guān)，但不能排除是否與轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體1和轉(zhuǎn)錄異構(gòu)體2啟動(dòng)子區(qū)有關(guān)。
　　 第三章中國(guó)一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性無虹膜癥家系的基因連鎖定位
　　 目的：先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的致病基因是否與PAX6基因有關(guān)。
　　 方法：提取中國(guó)一個(gè)常染色體顯性遺傳先天性無虹膜家系A(chǔ)NL的2個(gè)分支現(xiàn)存21人基因組DNA，并在PAX6基因附近選取6個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記D11S904、D11S1324、D11S914、D11S1776

10、、D11S907和D11S935進(jìn)行連鎖分析，采用LOD值兩點(diǎn)連鎖分析，并構(gòu)建單體型。
　　 結(jié)果：6個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記中在PAX6基因下游微衛(wèi)星標(biāo)記D11S1324取得LOD最大值3.16(θ=0)，且其附近標(biāo)記物的LOD值均在θ=0時(shí)取得大于1的正數(shù)。單體型分析表明6個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記構(gòu)成的區(qū)域在家系中呈現(xiàn)出與疾病表型共分離現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：先天性無虹膜癥家系A(chǔ)NL的致病基因定位與PAX6基因附近，并且位于PAX6基因下游的可