一個常染色體顯性遺傳先天性白內障家系的致病基因的定位研究.pdf

1、目的：
　　 先天性白內障是兒童常見的致盲性眼病,流行病學調查顯示其患病率為(0.6～6)/10000,新生兒發(fā)病率為(2.2～2.49)/10000[1],先天性白內障約有1/3是遺傳的,其遺傳方式有常染色體顯性遺傳(autosomal dominant congenital cataract,ADCC),常染色體隱性遺傳和X連鎖遺傳3種,其中常染色體顯性先天性白內障最為常見。先天性白內障患者給家庭和社會帶來沉重的負擔。隨著遺

2、傳學和分子生物學的發(fā)展,迄今為止,發(fā)現(xiàn)至少有22個基因與ADCC的發(fā)生有關,包括10個晶狀體蛋白基因(CRYAA、CRYAB,CRYBB1,CRYBB2,CRYBB3、CRYBA4、CRYBA1/A3,CRYGC,CRYGD,CRYGS),4個膜蛋白基因即縫隙連接蛋白基因(GJA3、GJAB),主要內源性膜蛋白基因(MIP26)和晶狀體內在膜蛋白基因(LIMI/MP19),4個轉錄調節(jié)因子(MAF,PITX3,HSF4,PAX6),細胞

3、骨架蛋白基因之一(BFSP2),上皮細胞激酶基因(EPHA2),染色質修飾蛋白基因(CHMP4B)以及鐵蛋白輕鏈基因(FTL)。充分利用遺傳資源的優(yōu)勢,發(fā)現(xiàn)新的白內障致病基因并揭示其突變規(guī)律和特點,并用于產(chǎn)前基因篩查、基因診斷和遺傳咨詢,將有效地預防先天性白內障患兒的出生,提高人口質量。本研究收集了生活在我國東北遼中地區(qū)的遺傳先天性白內障大家系,就其相關致病基因進行了一系列的分子遺傳學研究。
　　 方法
　　 家系材料收

4、集,排除眼部和全身其他遺傳性疾病,對所有家系成員眼前節(jié)散瞳檢查,并對先證者做表型認定,繪制家系系譜圖。經(jīng)知情同意后,采集先證者及家系成員外周血4ml,-70℃冷凍保存?zhèn)溆?。用Universal Genomic DNA ExtractionKit Ver.3.0提取家系成員白細胞基因組DNA,在染色體上的1p36、1q21-q25、2q33-q35、3q21-q25、10q25、11p13、11q23-q24、12q12-q14、13q1

5、1-q13、16q22.1、16q23、17q11-q12、21q22.3、22q11-q12區(qū)段內選取52個多態(tài)性微衛(wèi)星標記進行連鎖分析。通過含7 mol/L尿素的8％聚丙烯酰胺變性凝膠電泳分離PCR等位片段,硝酸銀染色顯色,根據(jù)凝膠上DNA片段大小確定微衛(wèi)星標記等位基因及家系中各成員的基因型。應用LINKAGE軟件(version 5.2)中的MLINK進行微衛(wèi)星標記與該家系致病位點的兩點間連鎖分析,計算LOD值。判斷標準:Lod值

6、≥3,兩個位點肯定連鎖:Lod值≤-2,兩個位點不連鎖；-2　　 結 果
　　 該家系成員共計21人,有8人患病(男性2人,女性6人)；現(xiàn)存家系成員共計19人,患者都現(xiàn)存。共采集外周血15人份,其中患者血樣8人。先證者Ⅳ1表型為繞核白內障,其他家系成員已行白內障摘除

7、手術。先天性白內障在家系中連代相傳,男女均有發(fā)病,符合常染色體顯性遺傳特點。根據(jù)微衛(wèi)星標記等位基因在8％聚丙烯酰胺尿素變性凝膠中的分布情況,分析家系成員的基因型組成。根據(jù)連鎖分析軟件LINKAGE(version5.2)的要求,建立每個微衛(wèi)星標記連鎖分析的家系檔案。通過對家系成員進行微衛(wèi)星標記的連鎖分析,發(fā)現(xiàn)位于染色體1p36、1q21-q25、2q33-q35、3q21-q25、10q25、11p13、11q23-q24、12q12-

8、q14、13q11-q13、16q22.1、16q23、21q22.3、22q11-q12區(qū)段的48個微衛(wèi)星標記與常染色體顯性白內障大家系均無連鎖關系,LOD值為負值。但位于17q11-q12的微衛(wèi)D17S469和D17S184,當0=0時,最大LOD值為2.71。
　　 結 論
　　 本研究收集的先天性白內障家系,系譜分析表明為常染色體顯性遺傳。在家系的全部患病成員中,排除了與染色體1、2、3、10、11、1213、1