分子靶向藥物及其與化療藥物聯(lián)合對人非小細胞肺癌細胞系生長抑制作用研究.pdf

1、目的：本研究以人非小細胞肺癌細胞系A549和NCI-17460為研究對象，選擇目前非小細胞肺癌標準一線治療方案中的化療藥物紫杉醇(Paclitaxel，PAC)和吉西他濱(Gemcitabine，GEM)，標準二線治療藥物培美曲塞(Pemetrexed，MTA)以及分子靶向藥物中針對EGFR和HER．2的單克隆抗體Cetuximab(C-225)和Trastuzumab(TRA)，通過體外實驗，分別觀察MTA與化療的不同聯(lián)合作用方式及靶

2、向藥物的聯(lián)合對人非小細胞肺癌細胞系A549和NCI-H460的抑制作用。以期為臨床治療中方案的選擇、用藥順序提供一定的參考。 方法： (1)．采用繪制細胞生長曲線，計算半數(shù)抑制濃度(IC<,50>)，MTT比色實驗以及集落抑制實驗等方法觀察MTA、PAC、GEM、C-225和TRA單藥及不同濃度和不同聯(lián)合作用方式下對細胞的增殖抑制作用。并采用中效原則計算各聯(lián)合用藥組的聯(lián)合指數(shù)(CI值)，分析藥物聯(lián)合作用的效應是協(xié)同、相加

3、或拮抗。 (2)．采用細胞化學、細胞周期和Annexin V-FITC/PI雙標記染色等方法分析細胞形態(tài)學、周期分布和細胞凋亡情況。 結(jié)果： 實驗一，MTA聯(lián)合PAC對A549和NCI-H460細胞系增殖抑制的聯(lián)合效應與用藥順序有關，中效原則分析證實序貫用藥表現(xiàn)為協(xié)同效應(CI值<1)，同步用藥表現(xiàn)為拮抗效應(CI值>1)；且序貫用藥組在導致細胞周期阻滯和誘導凋亡方面均優(yōu)于同步組。比較序貫組間的作用發(fā)現(xiàn)，與對照組

4、相比，PAC→MTA組誘導A549細胞凋亡增加的比率略高于MTA→PAC組(28.84％vs．29.45％)，但兩者差異很?。籑TA→PAC組誘導NCI-H460細胞凋亡增加的比率高于PAC→MTA組(13.29％vs.7.22％)。 實驗二，MTA聯(lián)合GEM對兩細胞系增殖抑制的聯(lián)合效應也與用藥順序有關，中效原則分析證實序貫用藥表現(xiàn)為協(xié)同效應(CI值<1)，同步用藥表現(xiàn)為拮抗效應(CI值>1)；并且序貫用藥組在導致細胞周期阻滯和

5、誘導凋亡方面均優(yōu)于同步組。比較序貫組間的作用發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，GEM→MTA組誘導A549細胞凋亡增加的比率高于MTA→GEM組(26.46％vs.22.00％)：GEM→MTA組誘導NCI-H460細胞凋亡增加的比率也高于MTA→GEM(13.40％vs.10.27％)。 實驗三，C-225聯(lián)合TRA對A549和NCI-H460細胞系增殖的影響。發(fā)現(xiàn)TRA可以增強C-225對細胞增殖的抑制作用，聯(lián)合TRA對A549細胞的抑制

6、率較單藥C-225增加6.6％，對NCI-H460細胞的抑制率增加2.2％；周期分布和凋亡檢測顯示，單藥C-225較對照組可使A549細胞G0/G1期阻滯增加6.09％，細胞凋亡比率增加1.03％，卻對NCI-H460細胞周期和凋亡比率影響不大；聯(lián)合TRA后可使A549細胞凋亡比率增加4.89％，NCI-H460細胞凋亡率增加8.93％。 結(jié)論： (1)．MTA、PAC和GEM三藥單獨作用時均能抑制人NSCLC細胞系A5

7、49和NCI-H460的增殖，并且存在劑量依賴性，藥物劑量越高，抑制作用越明顯；C-225在一定劑量范圍內(nèi)，對兩細胞系增殖抑制作用表現(xiàn)為劑量依賴性。 (2)．NSCLC二線標準治療藥物MTA聯(lián)合一線化療藥物(PAC和GEM)對腫瘤細胞的生長抑制與聯(lián)合方式相關。MTA與PAC聯(lián)合時序貫給藥方式表現(xiàn)為協(xié)同效應，且抑制細胞增殖、阻滯細胞周期和誘導細胞凋亡的作用優(yōu)于同步給藥的方式，序貫應用比同步應用可增強療效。MTA聯(lián)合GEM時也存在相