低氘水對(duì)人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549生長抑制作用及其相關(guān)機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：研究低氘水對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞A549的生長抑制作用及其相關(guān)機(jī)制。
　　方法：體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)利用MTT法檢測(cè)50ppm低氘水對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用；體內(nèi)分別建立裸鼠A549皮下移植瘤和原位移植瘤模型，觀察低氘水對(duì)裸鼠瘤體的影響。建模結(jié)束后，通過實(shí)體瘤觀察和HE組織染色，比較裸鼠肺組織的變化以及低氘水對(duì)皮下和原位移植瘤瘤體的影響。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）技術(shù)檢測(cè)A549細(xì)胞內(nèi)基因表達(dá)情況。通過Gene Ontology對(duì)

2、差異表達(dá)基因進(jìn)行功能聚類和生物學(xué)途徑識(shí)別。最后利用氣質(zhì)聯(lián)用的代謝組學(xué)研究方法，比較荷瘤裸鼠血清中代謝物的差異。
　　結(jié)果：MTT實(shí)驗(yàn)表明，使用低氘水處理A549細(xì)胞5d和10d后均出現(xiàn)顯著的細(xì)胞生長抑制。裸鼠體內(nèi)A549皮下移植瘤結(jié)果顯示，低氘水組裸鼠瘤體生長緩慢。裸鼠A549原位移植瘤結(jié)果表明，對(duì)照組肺組織上產(chǎn)生多個(gè)瘤體，分布密集，嚴(yán)重?cái)D壓肺組織，造成肺組織畸形。而低氘水組裸鼠肺組織上僅有少數(shù)瘤體，肺組織形狀保持相對(duì)正常。肺組織

3、HE染色表明，低氘水組肺組織中的腫瘤病灶明顯比對(duì)照組小。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序（RNA-seq）分析了對(duì)照組、50ppm-5d和50ppm-10d的A549基因表達(dá)情況。找到與增殖密切相關(guān)的差異表達(dá)基因有KRT18、ANGPTL、FTH1、EGFR、GREM1、CAV1等；與凋亡密切相關(guān)的差異表達(dá)基因有BAX、CDKN1A、IER3、PEA15、DNAJB9、EGFR等。通過GO-BP聚類分析，發(fā)現(xiàn)并集差異表達(dá)基因可信度最高的功能聚類為血管生成（p

4、=2.8×10-12），其中包括ITGAV、COL4A2、ID1、ANGPTL4、SERPINE、EPHA2等差異表達(dá)基因?；跉赓|(zhì)聯(lián)用的代謝組學(xué)方法研究了裸鼠血清中的差異代謝物。主成分分析PCA得分圖結(jié)果表明，C與D組血清代謝物無明顯差異；C與LC組、D與LD組比較其血清代謝物都有明顯差異；而LC與LD組血清代謝物的比較，部分樣本出現(xiàn)聚集。利用PLS-DA使LC和LD組樣本點(diǎn)出現(xiàn)明顯聚類，找到對(duì)分組貢獻(xiàn)大的18種代謝物，多為氨基酸和糖