運(yùn)用肝主疏泄理論防治應(yīng)激性抑郁癥的基礎(chǔ)研究.pdf

1、抑郁癥是一種常見的精神疾病，其終生患病率高達(dá)15％～20％。抑郁癥居高不下的發(fā)病率以及造成的危害，已經(jīng)越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視?？挂钟羲幬镉兄鴿撛诘氖袌鲂枨?，中藥抗抑郁新藥的研制開發(fā)才剛剛起步，研究的深度和廣度都有待進(jìn)一步提高，但市場開發(fā)的潛力是巨大的。 基于單胺策略開發(fā)的抗抑郁劑在臨床上出現(xiàn)療效滯后現(xiàn)象，并且大約有30％左右的重度抑郁癥人群對(duì)目前的各型抗抑郁劑沒有反應(yīng)。由于抑郁癥所涉及的病理因素復(fù)雜，存在著許多潛在的抗抑郁治

2、療靶點(diǎn)。大量的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究證據(jù)都指引我們要超越單胺能突觸策略去提高抗抑郁劑療效。 另外，基于單胺策略的抗抑郁劑對(duì)特定腦區(qū)的NMDA受體適應(yīng)性改變，即下調(diào)NMDA受體功能，產(chǎn)生類似NMDA受體拮抗劑的作用，可能是其抗抑郁效果的實(shí)質(zhì)。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)與臨床研究表明NMDA受體拮抗劑具有抗抑郁效果，拮抗NMDA受體功能可改善重癥病人癥狀，而且比現(xiàn)有的抗抑郁藥發(fā)揮作用更快。由此可見，調(diào)控NMDA受體的抗抑郁策略可能比傳統(tǒng)的單胺策略

3、更具優(yōu)勢。NMDA受體拮抗劑的最大問題就是出現(xiàn)精神病副作用，NMDA受體復(fù)合體上有多個(gè)調(diào)控位點(diǎn)以及NMDA受體本身的異質(zhì)性能提供了一些選擇性的藥物作用靶點(diǎn)，針對(duì)它們的拮抗劑可以預(yù)防興奮性毒性，又不阻斷全部NMDA受體，避免毒副作用的產(chǎn)生。 綜上所述，抗抑郁效果的一個(gè)重要特征就是能夠使失常的谷氨酸功能正?；６@種正?；梢酝ㄟ^直接作用于谷氨酸能突觸靶點(diǎn)，或者間接地通過其他神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)如5-HT，NE，GABA間接影響谷氨酸能系統(tǒng)

4、。 本研究團(tuán)隊(duì)在1999年在國內(nèi)首次提出的假說：中醫(yī)肝主疏泄調(diào)暢情志的功能在實(shí)現(xiàn)對(duì)交感—腎上腺髓質(zhì)以及下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)的整體性調(diào)節(jié)上，還可能存在著一定的具體的中樞神經(jīng)機(jī)制(包括相關(guān)不同腦區(qū)的定位、定量以及神經(jīng)生理生化及病理改變等)；在作用機(jī)理上體現(xiàn)出局部(中樞神經(jīng)機(jī)制)與整體(NIM網(wǎng)絡(luò))的有機(jī)統(tǒng)一。并以加味四逆散(JWSNS)作為調(diào)肝方藥的代表方，對(duì)其調(diào)控機(jī)體心理應(yīng)激反應(yīng)的機(jī)制進(jìn)行了一系列的研究，初步證實(shí)了我們的研

5、究假說。 在此基礎(chǔ)上，本研究以心理應(yīng)激性損傷所致的抑郁癥為研究切入點(diǎn)，結(jié)合抑郁癥最新的病理機(jī)制研究進(jìn)展與我們的前期工作基礎(chǔ)，我們進(jìn)一步提出假說：肝主疏泄調(diào)暢情志抗抑郁的中樞神經(jīng)機(jī)制可能是通過下調(diào)NMDA受體功能，抗興奮性毒性，減輕應(yīng)激性海馬損傷，保護(hù)海馬神經(jīng)元，調(diào)控HPA軸有關(guān)。 本研究以心理應(yīng)激損傷所致抑郁癥為研究對(duì)象，結(jié)合調(diào)肝治法方藥的作用機(jī)理，依據(jù)中醫(yī)方—證一效—臟腑相關(guān)性理論，進(jìn)一步揭示中醫(yī)肝臟象功能的本質(zhì)以及中

6、醫(yī)“肝主疏泄”理論的科學(xué)內(nèi)涵；豐富和創(chuàng)新中醫(yī)臟象和情志致病理論，為系統(tǒng)構(gòu)建運(yùn)用中醫(yī)調(diào)肝治法方藥防治心理應(yīng)激性損傷疾病的理論體系提供科學(xué)的依據(jù)。同時(shí)也為今后研究中醫(yī)不同臟腑機(jī)能以及不同病因致病機(jī)理提供思路和方法學(xué)的借鑒。 本項(xiàng)目的研究成果將一方面為臨床精神情志疾病的防治提供指導(dǎo)與理論依據(jù)；長期以來，我國在國際抗抑郁藥物市場中缺乏競爭力，根據(jù)現(xiàn)今我國抗抑郁藥的市場格局，國內(nèi)很多醫(yī)藥企業(yè)已把研發(fā)重心主要放在發(fā)展中藥抗抑郁藥方面。目前，

7、中藥抗抑郁新藥的研制開發(fā)才剛剛起步，研究的深度和廣度都有待進(jìn)一步提高，但市場開發(fā)的潛力是巨大的。本研究成果將對(duì)進(jìn)一步闡明抑郁癥的發(fā)病機(jī)理和今后開發(fā)出具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的抗抑郁創(chuàng)新中藥新藥，從而提高我國在國內(nèi)外抗抑郁藥物市場中的競爭力，促進(jìn)國民經(jīng)濟(jì)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。 第一部分研究報(bào)告第一節(jié)調(diào)肝方藥加味四逆散對(duì)慢性輕度不可預(yù)見性應(yīng)激模型體重和糖水消耗的影響采用WillnerP慢性輕度不可預(yù)計(jì)應(yīng)激動(dòng)物模型(CMUS)，并加于修改

8、。SPF級(jí)Wista大鼠，雄性，體重180-220g，廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。接受應(yīng)激處理的組別大鼠單獨(dú)放在一間獨(dú)立的房間，在21天接受不同應(yīng)激源的刺激，應(yīng)激源包括有限制空間1h、45度斜籠7h、濕籠17h(濕籠是200g鋪料倒100ml水，使墊料濕透)、新入侵者(兩籠并籠)23h、持續(xù)光照36h、空瓶1h、禁食禁水23h。大鼠按體重和基礎(chǔ)糖水消耗量分為4組：正常組(不施加任何刺激)、慢性輕度不可預(yù)計(jì)應(yīng)激模型組、JWSNS組(每

9、次早上8：30灌胃中藥JWSNS，每次2ml)，MK801組(每次早上8：30腹腔注射MK801，0.2mg/Kg/d)。正常組及慢性應(yīng)激組每次灌胃等量蒸餾水。其中正常組與其余各組分房飼養(yǎng)。 調(diào)肝方藥——加味四逆散(JWSNS)組成柴胡5g、白芍15g、枳殼6g、枸杞子15g、山梔5g、干地黃18g、石決明30g。藥材由本校第一附屬醫(yī)院藥房提供，經(jīng)藥劑科鑒定均為純正藥材。將中藥制成粗粉，首煎將中藥粗粉置8倍溫水中浸泡0.5h，沸

10、騰后文火煎煮4h，注意均勻攪拌，取汁后經(jīng)三層紗布過濾；第二次和第三次煎煮均分別以6倍水文火煎煮2h，同樣方法取汁，合并三次藥液，置水浴箱內(nèi)濃縮至含生藥1.69g/mL。藥液常溫冷卻后，置4℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆谩?經(jīng)過禁食禁水23h后，在整個(gè)應(yīng)激進(jìn)程的第21天下午15：00-16：00進(jìn)行糖水消耗實(shí)驗(yàn)，并測量體重。所有數(shù)據(jù)以X+S表示，采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、方差分析。(下同) 在造模之前各組大鼠的體重?zé)o差別(p＞0.

11、05)，糖水偏愛度(p＞0.05)，具有可比性；經(jīng)過21天慢性輕度不可預(yù)計(jì)應(yīng)激造模后，模型組、JWSNS組、MK801組體重及增重明顯低于正常組(p＜0.01)，而此三組組間無差異。表明CMS可引起大鼠體重下降，而加減四逆散及MK801對(duì)大鼠體重的下降無作用。模型組的糖水偏愛度明顯低于正常組(p＜0.01)，而加減四逆散、MK801組與正常組的糖水偏愛度，三組組間無差異。表明CMUS可引起大鼠糖水偏愛度下降，而加減四逆散及MK801能逆

12、轉(zhuǎn)CMUS抑郁大鼠的糖水偏愛度的下降。 第二節(jié)調(diào)肝方藥對(duì)慢性輕度不可預(yù)計(jì)應(yīng)激大鼠海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用動(dòng)物分組以及藥物和給藥方法基本與第一節(jié)同。海馬神經(jīng)元凋亡率采用流式細(xì)胞儀檢測分析，大鼠離體海馬腦片TTC染色，采用比色法。 第三節(jié)調(diào)肝方藥加味四逆散對(duì)慢性輕度不可預(yù)計(jì)應(yīng)激大鼠海馬NMDA受體通道的影響動(dòng)物分組以及藥物和給藥方法基本與第一節(jié)同。大鼠海馬NMDA受體單通道電流記錄與分析，采用膜片鉗細(xì)胞貼附式記錄NM

13、DA受體單通道電流。采用陽離子成像系統(tǒng)，應(yīng)用雙激發(fā)波長比例熒光測量法，檢測海馬神經(jīng)元內(nèi)單個(gè)細(xì)胞鈣離子濃度。 第四節(jié)調(diào)肝方藥加味四逆散對(duì)慢性應(yīng)激性抑郁癥大鼠海馬NMDA受體亞基表達(dá)的影響采用慢性多相應(yīng)激模型。采用的是慢性多相復(fù)合應(yīng)激模型。慢性多相性應(yīng)激源包括電擊足底(30V，電流強(qiáng)度1.0mA，每隔1min刺激1次，每次持續(xù)10s，共30次)、冰水游泳(4℃，5min)、夾尾(1min)、禁水(24h)、禁食(24h

14、)、限制(2h)。以上應(yīng)激刺激每天一種，隨機(jī)安排在21天內(nèi)。第22天取材。動(dòng)物分組與藥物同第一節(jié)。 第三部分綜合討論及研究結(jié)論第一節(jié)綜合討論一、調(diào)肝方藥JWSNS抗抑郁行為效應(yīng)中樞NMDAR是涉及情緒行為、學(xué)習(xí)記憶等腦功能的關(guān)鍵物質(zhì)，參與多種神經(jīng)和精神疾病的腦內(nèi)病理過程。NMDA受體對(duì)一些精神心理藥物很敏感。Kalivas采用放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NMDA受體在大腦皮質(zhì)、海馬、紋狀體、杏仁核等部位高密度表達(dá)，而這些區(qū)域都被認(rèn)

15、為是在認(rèn)知和情緒功能起作用的腦區(qū)。 在束縛、強(qiáng)迫游泳應(yīng)激中采用C-fos為探針，發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元大量激活，而這種激活可以為預(yù)先給NMDA受體拮抗劑所抑制，表明了谷氨酸能神經(jīng)遞質(zhì)的參與。而束縛、強(qiáng)迫游泳應(yīng)激引起的海馬谷氨酸釋放的增高在應(yīng)激開始幾分鐘就出現(xiàn)，而持續(xù)時(shí)間超過應(yīng)激持續(xù)時(shí)間。 應(yīng)激后腦內(nèi)NMDA受體的活性和數(shù)量增加與應(yīng)激性行為障礙密切相關(guān)。在應(yīng)激前給予腦區(qū)灌注NMDA受體阻滯劑能減輕動(dòng)物的應(yīng)激性焦慮和抑郁。提示中樞N

16、MDAR在應(yīng)激所致行為效應(yīng)的腦機(jī)制中可能起著重要的作用。由此可見，慢性應(yīng)激引起的抑郁癥中NMDA受體起著非常重要的作用，NMDA受體的過度激活與動(dòng)物抑郁情緒有密切關(guān)系。而本研究發(fā)現(xiàn)調(diào)肝方藥JWSNS具有抗抑郁作用，改善抑郁癥動(dòng)物的“快感缺失”行為效應(yīng)，該效應(yīng)可能是通過認(rèn)為通過調(diào)節(jié)NMDA受體功能介導(dǎo)的。 二、調(diào)肝方藥JWSNS抗海馬神經(jīng)元興奮性毒性，保護(hù)海馬神經(jīng)元的作用應(yīng)激導(dǎo)致海馬損傷的機(jī)制之一被認(rèn)為是糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的谷氨酸和C

17、a2+依賴的NMDA受體的興奮性作用。 三、調(diào)肝方藥JWSNS對(duì)應(yīng)激性抑郁癥大鼠海馬神經(jīng)元NMDA受體的作用方式調(diào)肝方藥JWSNS能夠降低抑郁癥海馬神經(jīng)元NMDA受體通道的開放概率，使其開放時(shí)間減少，使得NMDA受體通道功能下降，使得NMDA受體通道介導(dǎo)的鈣信號(hào)下降，從而起到抵抗海馬神經(jīng)元凋亡，保護(hù)海馬神經(jīng)元的作用。 四、調(diào)肝方藥JWSNS對(duì)應(yīng)激性抑郁癥HPA軸的興奮性的影響傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為，HPA軸的興奮，主要與下