白內(nèi)障患者基因異常表達(dá)的研究.pdf

1、目的:白內(nèi)障是一種多因素疾病,除了遺傳因素這外,其發(fā)病和發(fā)展還與年齡、性別、放射(可見(jiàn)光,紫外線,X線等)、氧化、物理?yè)p傷、飲食和用藥等因素有關(guān),這些因素可以導(dǎo)致基因表達(dá)的異常而影響晶狀體的透明度,最終形成白內(nèi)障.該研究應(yīng)用mRNA差異顯示法比較不同類型白內(nèi)障患者晶狀體上皮細(xì)胞基因表達(dá)與正常人的差異,尋找白內(nèi)障的致病基因和抗病基因,以探討白內(nèi)障發(fā)病的分子機(jī)制.而警備高質(zhì)量的人類晶狀體上皮細(xì)胞總協(xié)調(diào)性和非協(xié)調(diào)性異種移植實(shí)驗(yàn)RNA是完成差異

2、顯示法的前提條件.組織標(biāo)本少,細(xì)胞RNA含量低,決定必須建立一套提取小于50mg的少量眼部組織(尤其是晶狀體前囊膜)總RNA的方法,并將該方法應(yīng)用到后面的差異顯示實(shí)驗(yàn)中.結(jié)論:1、提取少量組織和細(xì)胞總RNA時(shí)Trizol中添加糖原至終濃度為0.1μg/μl,可以明顯提高產(chǎn)量,不影響RNA的完整性和逆轉(zhuǎn)錄酶及Taq酶的活性,可以應(yīng)用于該研究第二部分差異顯示和驗(yàn)證步驟中晶狀體囊膜總RNA的提取.2、該研究發(fā)現(xiàn)26個(gè)各類型白內(nèi)障與正常人晶狀體