牛蒡根提取物防治腫瘤作用的初步評價.pdf

1、目的:牛蒡(ArctiumlappaL.)是菊科牛蒡?qū)僦参?。其果實牛蒡子為我國的法定藥?其根則作為食品,由于具有潛在的“防癌作用”而在日本受到歡迎。上個世紀60年代,日本學者曾經(jīng)在牛蒡根中提取獲得了多炔類化合物,而近來的研究表明多炔類化合物很可能具有抗腫瘤的生物活性。本試驗研究的目的在于探求牛蒡根中是否具有防治腫瘤的活性成分,為進一步深入研究開發(fā)牛蒡根打下基礎。
　　 方法:①牛蒡根的生藥學鑒定采用常規(guī)感官法及顯微鑒別法?；瘜W

2、成分鑒別采用薄層色譜法,以氯仿-甲醇-水(40:8:1)為展開劑,置紫外燈(254nm)下檢視。試驗用樣品制備采用液-液分配萃取法。牛蒡根切片,室溫陰干,以95％乙醇提取,回收溶劑。醇浸膏水混懸后,依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,連同萃取后的水層(及混懸物)分別回收溶劑,得到相應不同極性的五部分樣品。②樣品抗腫瘤活性評價采用MTT法體外腫瘤細胞(小鼠腫瘤HepA和S180)增殖抑制試驗,評價指標為樣品的IC50；③樣品免疫活性

3、評價采用體外ConA誘導的淋巴細胞增殖試驗,評價指標為對淋巴細胞增殖的促進(或抑制)率；④樣品減毒活性評價采用體外腫瘤化療藥物阿霉素、順鉑殺傷骨髓細胞的體外試驗模型,觀察樣品對殺傷骨髓細胞的保護作用；⑤樣品化療增效作用的評價以體外腫瘤細胞增殖抑制試驗為基礎,觀察合用樣品后對化療藥物阿霉素IC50的影響；⑥防癌作用的評價采用Ames試驗,選擇TA98測試菌株,選擇化療藥物阿霉素為陽性誘變劑,以阿霉素產(chǎn)生誘變作用并在此基礎上觀察樣品有無抗誘

4、變活性。
　　 結果:①牛蒡根鮮品為肉質(zhì)根圓柱型,皮黑褐色,有皺紋。肉質(zhì)灰白色,味微苦而性粘。鮮品的含水量約為83.60％。顯微鏡下細部特征為木栓層為數(shù)列細胞,皮層較寬,韌皮部呈長三角形,韌皮射線寬廣；形成層明顯；木質(zhì)部導管較多,呈放射狀排列,無髓；中心附近裂隙多見?；瘜W成分分析表明牛蒡根中不含牛蒡子中特有抗癌活性成分牛蒡苷。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水層提取物的收率分別為0.20％、0.18％、0.40％、4.08％、1

5、3.55％。
　　 ②牛蒡根各部分提取物對小鼠HepA、S180腫瘤細胞均有不同程度的細胞毒作用,在一定濃度范圍內(nèi)基本上保持明確的量效關系。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物對肝癌HepA細胞的IC50分別為25.97、30.62、40.67、81.80、988.81μg/mL。對小鼠S180細胞的IC50分別為9.42、13.30、50.71、32.18、2395.80μg/mL。其中石油醚、氯仿、提取物顯示出較強

6、的細胞毒作用,水提取物的細胞毒作用很低。
　　 ③牛蒡根各部分提取物對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞(主要是T淋巴細胞)的增值表現(xiàn)出了明確的抑制作用,其對淋巴細胞增殖的抑制作用基本上呈劑量依賴性。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物對淋巴細胞增殖抑制的IC50分別為26.67、28.68、27.26、156.88、629.23μg/mL。
　　 ④牛蒡根正丁醇提取物與水提取物均可對阿霉素所致小鼠骨髓細胞的損傷具有

7、一定的保護作用,其中正丁醇提取物的作用稍優(yōu)于水提取物,正丁醇提取物濃度為10、40μg/mL時可明確對抗阿霉素對骨髓細胞的殺傷作用,提高骨髓細胞的存活率細胞存活率由41.71％提高到45.07％、49.40％(P<0.05)。樣品濃度為2.5μg/mL可明確降低順鉑所致骨髓細胞毒作用。細胞存活率有61.78％提高到66.59％(P<0.05)。牛蒡根水提取物對順鉑所致骨髓細胞損傷的保護作用較弱,僅在低劑量(2.5μg/mL)時表現(xiàn)出一定

8、的保護作用。
　　 ⑤牛蒡根石油醚提取物(3μg/mL)、氯仿提取物(3μg/mL)同阿霉素合用后,阿霉素對小鼠HepA腫瘤細胞的IC50分別為3.76、3.11μg/mL與單用阿霉素IC50(4.69μg/mL)相比有所降低,但無統(tǒng)計學意義。而乙酸乙酯提取物(5μg/mL)同阿霉素合用后,阿霉素對小鼠HepA腫瘤細胞毒的IC50提高到5.39μg/mL,亦無統(tǒng)計學意義。
　　 ⑥牛蒡根正丁醇提取物及水提物,其測試濃度為

9、0.1、1.0、10.0μg/mL時,均能減低阿霉素對TA98菌株的誘變作用,其誘變抑制率分別為31.15、65.41、69.78％和34.43、60.93、67.25％,表現(xiàn)出一定的量效關系。其中正丁醇提取物的中、高劑量組及水提物的中、高劑量組與阿霉素組相比,差異有顯著性(P<0.05),顯示出它們對阿霉素的誘變有中度抑制作用。
　　 結論:牛蒡根和牛蒡子的化學成分存在差異,前者不含有已知具有抗腫瘤活性的化學物質(zhì)牛蒡苷。牛蒡根