連翹提取物的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的： 1．研究連翹水提物體外對小鼠S180腫瘤細(xì)胞的抑制作用并對其活性部位進(jìn)行初步篩選； 2．研究連翹水提物體外對小鼠脾細(xì)胞的增殖抑制作用并對其免疫調(diào)節(jié)作用的活性部位進(jìn)行初步篩選； 3．研究連翹水提物活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用。 方法： 1．采用小鼠S180腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞體外增殖模型對連翹水提物的抗腫瘤活性部位及其免疫活性有效部位進(jìn)行初步篩選： （1）取連翹原藥材（生藥）加12倍蒸餾水煎煮

2、1．5h，連續(xù)3次，合并煎煮液，減壓濃縮，得連翹水提物（FSE）。 （2）取連翹水提物，依次用石油醚、乙醚、乙酸乙酯等進(jìn)行萃取，剩余部位用80％乙醇醇沉。分別得到石油醚部位（FSⅠ），乙醚部位（FSⅡ），乙酸乙酯部位（FSⅢ），乙醇溶解部位（FSⅣa）和乙醇沉淀部位（FSⅣb）。 （3）采用MTT法，觀察連翹水提物及其上述化學(xué)部位對S180腫瘤細(xì)胞和脾細(xì)胞體外增殖的影響，對其有效部位進(jìn)行初步篩選。 2．采用體外和

3、體內(nèi)多種實驗?zāi)Ｐ蛯B翹提取物活性部位的免疫調(diào)節(jié)作用進(jìn)行研究：ConA誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測對T細(xì)胞增殖功能的影響、LPS誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)檢測對B細(xì)胞增殖功能的影響、MTT法檢測對腹腔滲出細(xì)胞代謝活力的影響、ELISA方法檢測對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α的影響、ELISA方法檢測對小鼠脾細(xì)胞分泌INF-γ和分泌IL-2的影響、雞紅細(xì)胞法檢測對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（MФ）體內(nèi)吞噬功能的影響、有限稀釋微量溶血法檢測對小鼠血清溶血

4、素水平的影響、耳廓腫脹法檢測對小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響等。 結(jié)果： 1．連翹水提取物以及其乙醇溶解部位（FSⅣa）對小鼠S180腫瘤細(xì)胞的體外增殖有顯著的抑制作用，與實驗對照組比較差異具有顯著性（P<0．05）。其余化學(xué)部位對小鼠S180腫瘤細(xì)胞的體外增殖沒有顯著的抑制作用。 2．連翹水提物以及其乙醇溶解部位（FSⅣa）對小鼠脾細(xì)胞增殖的體外增殖有較強(qiáng)的抑制作用，與實驗對照組比較差異具有顯著性（P<0．05），其

5、乙醇沉淀部位（FSⅣb）在高濃度時（8mg·mL-1）也有顯著的抑制，與實驗對照組比較差異具有顯著性（P=0．008）．其余化學(xué)部位對小鼠脾細(xì)胞的體外增殖沒有顯著的抑制作用。 3．實驗結(jié)果表明，連翹水提取物的乙醇溶解部位（FSⅣa）對Con A誘導(dǎo)的小鼠脾細(xì)胞增殖、LPS誘導(dǎo)的脾細(xì)胞增殖、腹腔滲出細(xì)胞代謝MTT活力、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α、小鼠脾細(xì)胞分泌INF-γ、小鼠脾細(xì)胞分泌IL-2、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（MФ）體內(nèi)吞噬