爪蟾卵母細胞表達體系的建立及其表達的NMDA受體藥理學特性的研究.pdf

1、目的：作為異源性表達載體，非洲爪蟾卵母細胞用于各種蛋白的表達，包括受體、離子通道、轉運體等，為研究所表達蛋白的結構、功能及藥理學特性提供了重要的手段。本實驗旨在建立爪蟾卵母細胞表達體系，并進一步研究所要表達的NMDA受體蛋白的結構及功能。 方法：在去除濾泡膜的非洲爪蟾卵母細胞上，建立雙電極電壓鉗記錄技術，并使用該技術觀察爪蟾卵母細胞表達的內(nèi)源性遞質門控性和電壓門控性離子通道電流。將所研究的NMDA受體亞單位NR-1A、NR-2A

2、、NR-2B的cDNA分別體外轉錄為cRNA后，將其射到爪蟾卵母細胞進行表達。采用雙電極電壓鉗技術證實NR-1A/NR-2A和NR-1A/NR-2B受體的功能性表達。并對所表達的NMDA受體不同亞型的藥理學特性進行了研究。 結果：灌流液中分別加入NMDA受體、γ-氨基丁酸和煙堿受體激動劑，均未能在未注射外源性cRNA的爪蟾卵母細胞上誘發(fā)出電流。去極化刺激僅可誘發(fā)出一外向電流。將NR-1A/NR-2A、NR-1A/NR-2B分別注

3、入爪蟾卵母細胞后，灌流液中加入NMDA受體激動劑L-谷氨酸和甘氨酸可在卵母細胞上誘發(fā)出內(nèi)向電流，其中注射過2B亞單位激活的電流可被2B選擇性拮抗劑氟哌啶醇阻斷，而對注射過2A亞單位激活的電流作用不明顯。胍丁胺和苯環(huán)壬酯手性化合物能可逆性阻斷NMDA受體(NR-1A/NR-2A、NR-1A/NR-2B)電流，其中胍丁胺的阻斷作用除具有電壓依賴性外還有濃度依賴性。 結論：成功建立了爪蟾卵母細胞表達體系，并使用雙電極電壓鉗記錄技術，對