兩種人體蠕形螨超微結(jié)構(gòu)和基因組提取的研究.pdf

1、本研究的目的是應用環(huán)境掃描電子顯微鏡(environmentalscanningelectronmicroscope，ESEM)技術(shù)觀察人體蠕形螨的超微結(jié)構(gòu)，確定其口器性質(zhì)，尋找其與致病和分類有關(guān)的超微結(jié)構(gòu)。用客觀證據(jù)說明蠕形螨是否致病，做出超微結(jié)構(gòu)分類并對原形態(tài)學分類進行評價。 提取兩種人體蠕形螨基因組，為人體蠕形螨分子生物學研究鋪平道路。方法用刮片式取螨器從成人額部取螨，置于2％洗潔精溶液中，在解剖鏡直視下，用自制挑螨器分離

2、清洗干凈。 將潔凈活螨按觀察部位的要求，在解剖鏡下擺上電鏡樣品托，立即掃描，拍攝照片。環(huán)境掃描電鏡工作參數(shù)：工作距離(WD)7.5-9.3mm、高電壓(HV)20.0KV、高真空探頭(Det)GSED、束斑(Spot)3.0、溫度5℃、壓力0.5kpa、相對濕度60％。 將潔凈新鮮的毛囊蠕形螨(Demodexfolliculorum，D.f.)、皮脂蠕形螨(Demodexbrevis，D.b.)分別在解剖鏡直視下研磨粉碎

3、。用改進的小型昆蟲基因組提取方法，分別提取兩種人體蠕形螨的基因組DNA，將提取物進行瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光度計檢測。 結(jié)果:D.f.的口器位于顎體腹面。口孔是兩片口下板中間的狹長縱向裂隙，有一劍峰狀的口針從裂隙中向前下方伸出，但未見牙齒。推斷其口器是一種特殊的刺吸式口器。D.b.的口器與D.f.相似，但尚未見口針伸出。 D.f.須肢位于顎體兩側(cè)，分三節(jié)，末節(jié)可向腹面做超過90°的運動。末端似釘鞋底狀，其上有7個須肢爪，

4、刺狀。前三個呈三角形排列，后四個緊密排成兩排。D.b.須肢較短，末節(jié)上只有5個須肢爪。 D.f.口下板為梨形，外板較平；D.b.口下板短而寬，呈寬橢圓形，外板唇狀。 D.f.錐狀突為寶劍頭狀，短于口下板，兩基內(nèi)葉伸向其前方融合：D.b.的錐狀突為三角形，達顎體最前緣，與口下板幾乎等長，其前無基內(nèi)葉包圍。 D.f.的兩個背基刺像具有單上瞼的眼睛，其瞼狀結(jié)構(gòu)可睜可閉，如此結(jié)構(gòu)推測為感覺器官，建議稱之為顎感器；D.b.

5、的兩個背基刺呈黃豆形，著生于陷窩內(nèi)，無瞼樣結(jié)構(gòu)覆蓋，位于顎基背面前外側(cè)。 只有D.f.雄螨具四個蕈狀背足體毛，分別于第一、第二足水平足體背外側(cè)。而D.f.雌蟲D.b.雄螨、雌螨都未發(fā)現(xiàn)背足體毛。 D.f.雄螨生殖器位于足體背部第一、二足水平中央，陽莖呈毛筆頭狀，可從基鞘的縱向裂隙中伸出：觀察50個D.b.，未發(fā)現(xiàn)雄性外生殖器。 D.f.雌螨陰門于足體第四足水平：D.b.陰門前端位于第四足水平之后。 D.f

6、.的足較粗壯，每足具雙叉爪、三叉爪各一個，雙叉爪后有指向后方的爪距；D.b.足較細，每足具單叉爪、雙叉爪、三叉爪各一個，無爪距。 D.f.有股距；D.b.沒有股距。 D.f.的末端皮紋呈“同心圓”形：D.b.的末端皮紋呈“扁同心圓”形。 D.f.和D.b.均沒有觀察到顎腹毛和肛門。 分別成功提取出兩種人體蠕形螨的基因組DNA。瓊脂糖電泳顯示為一整齊的高分子量條帶，紫外分光度計檢測計算OD260/OD280

7、均大于1.6。 結(jié)論:用環(huán)境掃描電鏡能夠清楚、真實地展示人體蠕形螨的超微結(jié)構(gòu)。與以往的普通掃描電子顯微鏡相比，樣品不需特殊處理，方便、快捷、圖像逼真，避免了假性結(jié)構(gòu)的干擾。 確定人體蠕形螨具有一種特殊的刺吸式口器。口孔為一縱裂，內(nèi)有可伸縮的口針。認為口器、須肢爪、足爪、爪距、足距是機械性致病的銳器。兩種人體蠕形螨的口下板、錐狀突、背基刺、背足體毛、外生殖器、末端皮紋等超微結(jié)構(gòu)存在差異，可以作為形態(tài)分類的指標。以往的分類基