羊胎盤免疫調(diào)節(jié)因子免疫生物活性評價的初步研究.pdf

1、該課題以Mr10 000的羊胎盤免疫調(diào)節(jié)因子GPIF(goat plancentaimmunoregulatory factor,GPIF)為免疫生物活性評價樣品材料,對GPIF免疫生物活性進行了評價方法的比較篩選、免疫生物活性評價方法的優(yōu)化,并在此基礎(chǔ)上對GPIF進行了免疫生物活性評價,確立了GPIF免疫生物活性劑量效應(yīng)曲線,探討了不同工藝方法及處理因素對GPIF免疫生物活性的影響,與同類藥品免疫生物活性進行了對比.1、GPIF免疫生

2、物活性評價實驗樣品材料的準(zhǔn)備;通過對GPIF免疫生物活性評價實驗樣品材料的一般理化指標(biāo)鑒定,光譜、指紋圖譜檢測和安全性評價,顯示由該工藝制備的實驗樣品材料理化性質(zhì)穩(wěn)定,活性成分含量充足,安全可靠,可以用來作為GPIF免疫生物活性的評價.2、GPIF免疫生物活性評價方法的比較篩選;初步比較篩選了兩種形態(tài)學(xué)免疫生物活性評價方法,E玫瑰花環(huán)實驗和淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗及兩種光學(xué)比色免疫生物活性評價方法,淋巴細胞增殖實驗MTT法和淋巴細胞增殖實驗Br

3、dU-ELISA法.并對初步篩選的E玫瑰花環(huán)實驗和淋巴細胞增殖BrdU-ELISA實驗進行了進一步篩選.最終確定GPIF免疫生物活性評價方法為:T細胞來源于胸腺的E玫瑰花環(huán)實驗和PHA誘導(dǎo)的淋巴細胞增殖BrdU-ELISA實驗.3、GPIF免疫生物活性評價方法的優(yōu)化;對GPIF E玫瑰花環(huán)實驗在不影響SRBC活性的基礎(chǔ)上用神經(jīng)氨酸酶處理,經(jīng)此法處理后E玫瑰花環(huán)形成率明顯提高;對傳統(tǒng)的ConA誘導(dǎo)的人外周血淋巴細胞增殖BrdU-ELISA

4、實驗,進行了方法學(xué)改進.采用PHA誘導(dǎo)的人外周血淋巴細胞增殖BrdU-ELISA實驗效果遠遠優(yōu)于ConA誘導(dǎo)增殖效果.4、GPIF免疫生物活性的評價;無論是E玫瑰花環(huán)實驗,還是細胞增殖BrdU-ELISA實驗,GPIF免疫生物活性都呈現(xiàn)了穩(wěn)定的劑量效應(yīng)關(guān)系.表現(xiàn)為低濃度(0.125mg/ml)免疫生物活性較低,隨著GPIF濃度升高而活性逐漸增強,到0.5mg/ml濃度附近時免疫生物活性達到最高,之后逐漸減弱.GPIF免疫生物活性劑量效應(yīng)

5、曲線呈正態(tài)分布.GPIF是一種細胞免疫增強劑.5、GPIF免疫生物活性影響因素的探討;分別對GPIF病毒滅活、凍干工藝及賦形劑的選擇、分子截留和制備工藝方法等影響因素進行了對比分析.研究結(jié)果顯示,病毒滅活、凍干工藝及賦形劑的選擇和分子截留對GPIF免疫生物活性沒有任何影響,但因制備工藝方法的不同,免疫生物活性也會有改變.免疫生物活性實驗證實超濾法提取的GPIF免疫生物活性優(yōu)于透析法.6、GPIF與同類藥品免疫生物活性比較研究;我們在對比