草蓯蓉多糖對(duì)叔丁基過氧化氫引起血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、目的:體外研究草蓯蓉多糖(BRPS)對(duì)叔丁基過氧化氫(TBHP)引起血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)機(jī)制。
　　方法:通過TBHP損傷內(nèi)皮細(xì)胞的方法構(gòu)建血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡模型，用四甲基偶氮唑鹽比色(MTT)法觀察BRPS對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的毒性作用;比色法觀察細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性;采用DCFH-DA熒光染色法觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的活性氧(ROS)變化;采用Hoechst和TUNE

2、L熒光染色觀察TBHP引起的內(nèi)皮細(xì)胞凋亡;采用JC-1熒光染色方法來觀察內(nèi)皮細(xì)胞線粒體跨膜電位的改變;利用Western blot檢測(cè)細(xì)胞tBid、Bax、 Bcl-2、 Cleaved caspase3、 Cleaved caspase8、 Cleaved caspase9、 Procaspase3、Procaspase8、Procaspase9和細(xì)胞色素c(Cyto c)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:與TBHP損傷組比較，BRP

3、S能明顯升高細(xì)胞存活率(P＜0.05);明顯降低內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)MDA水平(P＜0.05)，提高內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)GSH水平與SOD活性(P＜0.05)。DCFH-DA染色結(jié)果顯示，與正常組比較，TBHP損傷組ROS含量升高;與TBHP損傷組比較，BRPS組ROS含量呈逐漸下降趨勢(shì);Hoechst與TUNEL染色結(jié)果顯示，與正常組比較，TBHP損傷組細(xì)胞凋亡增加，視野內(nèi)細(xì)胞的數(shù)量減少;與TBHP損傷組比較，BRPS組細(xì)胞凋亡呈減少趨勢(shì)，視野內(nèi)細(xì)胞的數(shù)

4、量增多。JC-1染色結(jié)果顯示，TBHP損傷組細(xì)胞線粒體跨膜電位與正常組比較明顯下降，BRPS組細(xì)胞線粒體跨膜電位呈現(xiàn)升高趨勢(shì)。Western blot結(jié)果顯示，與正常組比較，TBHP損傷組Cleaved caspase3、Cleaved caspase8、Cleaved caspase9、Bax蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，Procaspase3、Procaspase8、Procaspase9、Bcl-2蛋白表達(dá)均顯著降低（P＜0.05

5、）;與TBHP損傷組比較，BRPS組Cleaved caspase3、Cleaved caspase8、Cleaved caspase9、Bax蛋白表達(dá)顯著降低（P＜0.05），Procaspase3、Procaspase8、Procaspase9、Bcl-2蛋白表達(dá)顯著升高(P＜0.05)。與正常組比較，TBHP損傷組胞漿Cyto c表達(dá)升高(P＜0.05)，線粒體tBid表達(dá)升高(P＜0.05);與TBHP損傷組比較，BRPS組胞漿