葎草醇提物對(duì)小鼠腸道離子通道的影響.pdf

1、目的:本試驗(yàn)以建立小鼠分泌性腹瀉模型為基礎(chǔ)，利用葎草醇提物對(duì)腹瀉小鼠進(jìn)行治療，通過(guò)研究葎草醇提物治療腹瀉效果及腸道離子通道相關(guān)基因的表達(dá)，探索葎草醇提物抗腹瀉的可能分子機(jī)理，為開(kāi)發(fā)新型抗腹瀉藥物及葎草資源的進(jìn)一步利用和規(guī)?；茝V應(yīng)用提供理論性的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:1、選取5～6周齡、體重為22±1.02g的SPF雄性小鼠30只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組、腹瀉模型組、葎草治療組（每組10只），除空白組外，其余兩組均用番瀉葉灌胃，每只1m

2、l致腹瀉模型。30min后，空白組和腹瀉組小鼠灌以0.6ml/只的生理鹽水；葎草治療組灌以0.6ml的葎草醇提物（黃酮含量3.47％），試驗(yàn)周期為7天，計(jì)數(shù)每天內(nèi)的大便性狀及糊狀便的次數(shù)，觀察小鼠精神狀態(tài)、體重變化、DAI評(píng)分、結(jié)腸腸壁厚度以及其組織病理變化的情況，評(píng)價(jià)葎草醇提物對(duì)小鼠的抗腹瀉作用；2、將試驗(yàn)中的各組小鼠在7天灌胃后全部處死，剪取各組小鼠結(jié)腸近端的組織進(jìn)行標(biāo)記，采用RT-PCR檢測(cè)各組小鼠結(jié)腸相關(guān)離子通道基因的表達(dá):鈉離

3、子通道（NHE2、NHE3、NHE8）、水離子通道（AQP2、AQP3、AQP4、AQP8）及氯離子通道（CFTR）；采用Western blot檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)，分別從mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平闡明葎草醇提物治療腹瀉的可能分子機(jī)理。
　　結(jié)果:1、治療組與腹瀉組相比，對(duì)小鼠精神恢復(fù)、體重變化以及腸絨毛恢復(fù)等均有明顯治療的作用；腹瀉組小鼠試驗(yàn)周期內(nèi)，精神萎靡，大便次數(shù)增加、飲食減少，體重下降明顯，對(duì)糞便潛血鑒定得出在第3天時(shí)大約

4、84%的小鼠潛血結(jié)果為陽(yáng)性，小鼠糞便經(jīng)肉眼觀察可見(jiàn)明顯的出血，腹瀉組的小鼠有不同程度的糞便出血情況表明造模成功。治療組小鼠較腹瀉組健康，隨著治療時(shí)間的延長(zhǎng)，基本恢復(fù)正常，糞便潛血試驗(yàn)已經(jīng)呈現(xiàn)出陰性；治療組相對(duì)腹瀉組體重有顯著的上升趨勢(shì)；相對(duì)于腹瀉組，治療組與空白組DAI的評(píng)分明顯降低；治療組腸壁厚度較腹瀉組顯著增加，治療效果顯著。病理組織學(xué)觀察，空白組小鼠小腸絨毛排列整齊，各層次結(jié)構(gòu)清晰，絨毛間質(zhì)無(wú)水腫、無(wú)小血管擴(kuò)張充血，而腹瀉組小鼠小

5、腸絨毛排列紊亂，大部分絨毛脫落，絨毛表面有炎性滲出，絨毛間質(zhì)水腫，小血管擴(kuò)張、充盈。治療組與腹瀉組相比癥狀明顯改變，小腸絨毛排列整齊，絨毛表面炎性滲出大部分消失，絨毛間質(zhì)無(wú)明顯水腫、無(wú)小血管擴(kuò)張、充血，小腸結(jié)構(gòu)與正常組織大致相同，治療效果明顯；2、RT-PCR結(jié)果顯示，與空白組小鼠相比，腹瀉組NHE2、NHE3、NHE8、AQP3、AQP4、AQP8、CFTR的表達(dá)明顯下調(diào)（P<0.05），AQP2的表達(dá)無(wú)明顯變化（P>0.05）；與腹

6、瀉組相比，治療組小鼠AQP3、AQP4、AQP8的表達(dá)明顯上調(diào)，NHE2，NHE3、NHE8、CFTR的表達(dá)無(wú)顯著性變化；Western blot結(jié)果顯示，與空白組相比，腹瀉組AQP3、AQP4、AQP8蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05）；與腹瀉組相比，治療組小鼠AQP3、AQP4、AQP8蛋白表達(dá)水平上調(diào)（P<0.05），具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:1、葎草醇提物對(duì)小鼠分泌性腹瀉具有很好的治療效果，對(duì)小鼠結(jié)腸腸粘膜結(jié)構(gòu)具有保護(hù)